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研究背景:早发型子痫前期(EO-PE)是发病于34周之前的一种妊娠特有的并发症,其发病原因众多,目前公认的滋养细胞侵袭力不足是其主要原因之一。细胞侵袭依赖于细胞骨架重塑和侵袭结构的形成,ACTN4作为肌动蛋白主要维持细胞骨架的完整性和调节细胞的运动。本课题旨在研究ACTN4在EO-PE胎盘滋养细胞中的表达,研究并探讨ACTN4表达异常对滋养细胞功能的影响,并探索其调控机制,以期为阐明子痫前期发病机制提供新的研究方向,并为子痫前期的预测和治疗提供潜在的靶点。方法:利用免疫组化法和Western blot法检测ACTN4在正常胎盘组织和EO-PE胎盘组织中的表达和定位,并分离原代滋养细胞,检测其在原代滋养细胞中的表达。然后用siRNA干扰方法对ACTN4进行敲降,并用CCK-8法、流式细胞周期和EdU法检测敲降细胞的增殖能力。用Western blot法检测敲降ACTN4后对AKT/GSK3β通路的影响。利用Co-IP法和胞质、胞膜分离法检测ACTN4对AKT膜转移及其活化的作用。用免疫荧光法和Co-IP法检测E-cadherin敲降细胞中ACTN4和β-catenin的定位和互作情况。用TRITC-phalloidin法检测敲降E-cadherin和(或)敲降ACTN4的JEG3细胞骨架的改变。并用Matrigel侵袭和Transwell迁移法检测各组细胞的侵袭和迁移能力。最后,通过尾静脉注射ACTN4干扰腺病毒构建ACTN4敲降孕鼠模型,测量孕鼠血压和胎盘、胎鼠重量情况,和胎盘、肾脏组织病理结构的变化及胎盘组织中ACTN4和AKT通路蛋白的表达情况。结果:免疫组化法和Western blot法结果显示,与正常胎盘滋养细胞相比,ACTN4在EO-PE胎盘滋养细胞中异常低表达。CCK-8法、流式细胞周期法和EdU法结果均显示敲降ACTN4显著降低HTR8/SVneo细胞的增殖能力,且Western blot法结果显示敲降ACTN4明显抑制AKT/GSK3β通路的活性。Co-IP法和胞质、胞膜分离法结果显示ACTN4和AKT之间存在相互作用,且ACTN4对于AKT膜转移并活化至关重要。另外,免疫荧光法、Co-IP法和Western blot法结果显示,E-cadherin敲降的JEG3细胞中,ACTN4和β-catenin相互作用关系明显增强,且这种增强主要表达定位于细胞伪足。TRITC-phalloidin法和侵袭迁移法结果显示,E-cadherin敲降的JEG3细胞骨架高度重塑且侵袭迁移能力明显增强,而在这基础之上再下调ACTN4的表达时,细胞骨架出现解聚,侵袭迁移能力随之明显减弱。最后,注射ACTN4干扰腺病毒的孕鼠,血压出现明显升高,胎盘和胎鼠重量出现明显下降,胎盘连接层面积和增殖细胞均出现明显减少,肾脏肾小球出现明显肿胀,胎盘ACTN4和AKT通路蛋白活性均明显下降。结论:ACTN4主要表达于胎盘的CTB细胞和iEVT细胞,且在EO-PE胎盘滋养细胞中的表达较正常组明显降低。ACTN4通过调控AKT的膜转位及活性进而调控滋养细胞的增殖能力,且ACTN4-β-catenin作为细胞骨架及细胞伪足形成的关键,参与滋养细胞侵袭和迁移能力,受E-cadherin负性调节。ACTN4敲降孕鼠出现胎盘化异常和PE样表型改变。