放射增敏剂3-烟酰氨基-1，4-二氮氧-1，2，4-苯并三嗪（代号NABZ），是我室正在进行临床前研究的具有潜在肿瘤增敏作用的化合物。本文的主要目标是合成NABZ，优化合成工艺，为新药的后续研究提供合格的原料；研究其在大鼠体内的药代动力学过程，尤其是代谢产物的研究；根据药代动力学参数和代谢物的确证，推测其在大鼠体内的代谢过程，为指导新药研究与开发提供重要的参考依据。主要工作如下：一、NABZ的合成工艺研究通过合成过程的比较分析，建立了NABZ的合成方法，优化了合成工艺；合成了主要的中间体3-氨基-1，4-二氮氧-1，2,4-苯并三嗪，用HPLC方法测定其纯度为99.21％。合成NABZ过程中，在绝对无水条件下缓慢滴加无水吡啶进行反应，用85％乙醇重结晶，得到了比较高的收率（55％），合成的三批原料药的纯度都达到99.17％以上。二、NABZ的药代动力学研究大鼠灌胃给药60、90和120 mg·kg^-1三个剂量后，NABZ的分布半衰期分别为9.66、12.73和16.42 min，消除半衰期分别为59.91、69.32和78.04 min，血浆药物浓度在分布半衰期后迅速下降，表明药物在体内的吸收和消除比较快。NABZ药代动力学的这一特点也符合该药作为放射增敏剂的特征。三个剂量下的AUC_0-∞分别为3628.39、4972.23和9257.05μg·min·mL^-1，血药浓度及浓度-时间曲线下面积（AUC）随剂量增大而增大，三个剂量下的最大血药浓度（Cmax）分别为39.39、49.82和97.96μg·mL^-1。在高剂量下，Cmax和AUC的增加尤为显著，显示出非线性动力学特征。三个剂量下总清除率分别为16.35、18.10和9.71 mL·kg^-1·min^-1，表观分布容积分别为927.74、1019.79和513.1 mL·kg^-1，结果也充分显示NABZ在大鼠体内代谢的非线性动力学特征。药物从胃肠道吸收迅速，药后15 min，主要分布在胃肠组织，其次是肝和肾，药后45 min，心，肝，脾，肺，脑和肾中的药物含量增加较快，胃肠中药物含量下降。药后90 min，各组织中药物含量都下降，显示药物在组织内没有产生明显的蓄积。三、NABZ在大鼠血浆及组织中代谢物的研究大鼠灌胃给药后，不同时间内，在血浆中共检测到四个代谢产物，烟酰胺（M1），3-氨基-1，4-二氮氧-1，2，4-苯并三嗪（M2），3-氨基-1，2，4-苯并三嗪（M5）和3-氨基-1-氮氧-1，2，4-苯并三嗪（M6），同时对其中的三个主要代谢物M2、M5和M6进行了合成和结构鉴定，考察了它们在血浆中的动态变化情况。在120mg·kg^-1剂量下，代谢物M2药后60 min在血浆中达到最大值，为48.52μg·mL^-1，60 min后，血药浓度迅速下降，4 h后，达到最小定量限以下；对于代谢物M5在药后0-3 h内，血药浓度缓慢升高，在3 h左右，浓度最大，达到35.17μg·mL^-1，此后又缓慢下降，表明该代谢物可能是NABZ的最终代谢产物；代谢物M6在药后60 min左右达到最大值，为43.37μg·mL^-1，尤其在45-60 min之间的血药浓度迅速增加，60 min后，缓慢下降。定性考察了大鼠给药后15、45和90 min在各组织中代谢物，90 min时，除了以上三个主要的代谢产物外，在肾和胃中还发现了一个新的代谢产物，推测可能为3-氨基-4-氮氧-1，2，4-苯并三嗪，其结构还需进一步确证。同时发现该代谢物在尿和粪中都存在。四、大鼠血浆及组织中三个主要代谢物的HPLC测定及动态研究建立了同时测定血浆及组织中三个主要代谢产物的HPLC方法。血浆和组织样品经处理后进行HPLC分析。色谱柱：Agilent Eclipse C₁₈（4.6×150 mm，5μm），流动相：甲醇-水-冰醋酸=20：80：0.5，流速：1.0 mL·min^-1，紫外检测波长：254 nm。用本法测定了大鼠给药后血浆中的三个主要代谢产物的体内动态。结果表明，三个主要代谢物在血浆中的代谢都比较快，单次给药4 h后，血药浓度已很低。各代谢物在组织中都有分布，4 h后，各组织的药物含量都很低，表明代谢物在组织中没有蓄积现象。五、大鼠灌胃NABZ后尿和粪中代谢物的研究用LC/MS的分析，合成代谢物对照品的方法，确证了尿和粪中的三个主要代谢物3-氨基-1，4-二氮氧-1，2，4-苯并三嗪（M2），3-氨基-1，2，4-苯并三嗪（M5）和3-氨基-1-氮氧-1，2，4-苯并三嗪（M6），与血浆中的代谢物一致，同时，确定了NABZ在大鼠尿中的Ⅱ相代谢产物3-氨基-1，4-二氮氧-1，2，4-苯并三嗪4位的葡萄糖醛酸结合物，即β-1-O-（2-氨基-4-氮氧-1，2，4-苯并三嗪基）-葡萄糖醛酸（M4）。大鼠120 mg·kg^-1灌胃给药后，分别收集0-2，2-4，4-8和8-12 h各时间段的胆汁，尿样和粪样，胆汁和尿样记录体积，粪样称重，-20℃冷冻保存。对NABZ，代谢物M2、M5和M6进行定量。试验结果显示，在胆汁中，主要以代谢物M2的形式排出，12 h的累积排泄量占给药量的8.11％，其次是M6和M5，分别为3.28和3.13％，NABZ在胆汁中以原药的形式排出占给药剂量的1.71％。在尿中，代谢物M5和M6的排泄累积量较高，分别占给药量的6.88和5.11％，其次是M2，为2.51％，原药以尿的形式排出的占给药量的1.20％。在粪中，代谢物M5的排泄累积量最高，占给药量的16.33％，其次是M6，为9.43％，以M1排出的占给药量的2.51％，在粪中没有检测到NABZ。大鼠灌胃NABZ后，主要以代谢物的形式在粪和尿中排出，胆汁的排泄量很少。其中以NABZ原药的形式排出的只有2.91％，以代谢物M2排泄的占给药量的13.17％，以代谢物M5排泄的占给药量的26.34％，以代谢物M6排泄的占给药量的17.82％。三个主要代谢物的累积排泄总量占给药量的57.23％。其余以原药和其它代谢的形式排出体外。六、结论本文研究了NABZ在大鼠体内的药代动力学特征，鉴定并合成了相关的代谢产物；测定了NABZ在大鼠体内的6个代谢物，确定了其中五个代谢产物的结构，分别为烟酰胺，3-氨基-1，4-二氮氧-1，2，4-苯并三嗪，3-氨基-1-氮氧-1，2，4-苯并三嗪，3-氨基-1，2，4-苯并三嗪共4个Ⅰ代谢产物和3-氨基-1，4-二氮氧-1，2，4-苯并三嗪4位的葡萄糖醛酸结合物；推测了NABZ在大鼠体内的代谢过程如图0-1所示；首次确定了NABZ的三个活性代谢部位，对指导NABZ后续的结构改造，合成药代动力学性质更优的放射增敏剂具有很重要的指导意义。相关分析方法的建立和运用，对药物在体内分析和药代动力学研究具有重要的启示。