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目的:研究缺氧后适应中蛋白激酶Cε(PKCε)与钙敏感受体(CAR)相互作用对乳鼠心肌细胞的保护作用。
方法:Wistar乳鼠(出生后3-7天)心肌细胞培养3.5天,随机分为七组:正常对照组(N组),缺氧/复氧组(H/Re组),缺氧后适应组(HPC组),GdCl3组(GdCl3,NiCl2,CdCl2+HPC组),Caffeine组(Caffeine,GdCl3,NiCl2,CdCl2+HPC组),PKCε抑制剂组(PKCI+HPC组)和PKCI+GdCl3组(PKCI,GdCl3,NiCl2,CdCl2+HPC组)。采用饱和氮气pH6.8的D.Hands液和含20%新生牛血清的DMEM液复制心肌缺氧/复氧模型。MTT比色法检测各组细胞存活率,各组乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量变化的测定,心肌细胞膜CaR和PKCε蛋白表达水平Western blot检测,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)测定心肌细胞内游离钙([Ca2+]i)的变化,HE染色、Hoechest33342染色和TUNEL染色观察细胞凋亡,JC-1染色观察线粒体膜电位势能的变化。
结果:H/Re、GdCl3和PKCI组的MTT检测的细胞存活率和膜电位(JC-1)低于对照组和HPC组;反之,LDH活力和MDA含量高于对照组和HPC组。同时,在GdCl3、Caffeine和PKCI+GdCl3组CaR的蛋白表达水平较HPC和PKCI组增高,且细胞内[Ca2+]i、HE染色、Hoechest33342染色和TUNEL染色细胞凋亡结果也高于后两组;而在PKCI和PKCI+GdCl3组PKCε的蛋白表达水平低于H/Re、HPC、GdCl3和Caffeine组。
结论:在乳鼠心肌细胞缺氧后适应中,PKCε已转位到细胞膜和CaR相互作用,此相互作用能减轻[Ca2+]i,对缺氧的乳鼠心肌细胞在进行复氧时产生保护作用。