斑马鱼(Danio rerio)是一种体型较小的热带硬骨鱼,具有易繁殖、生殖周期短、遗传背景清晰、体外受精和胚胎发育透明等特点,并且斑马鱼和人类基因有着87%的高度同源性,因此斑马鱼已经成为继小鼠、果蝇和线虫之后的又一模式动物,目前已被广泛应用于遗传发育学、肿瘤生物学、分子生物学、药物筛选、毒性试验及环境监测等诸多领域。脾脏是斑马鱼体内的重要免疫器官,兼有造血、储血和免疫功能。心脏是斑马鱼体内最重要的供能器官,与鱼体内的物质转运、内环境稳定、防御功能密切相关。体肾是斑马鱼体内的主要排泄器官,参与鱼体内多种代谢物质的排泄。迄今为止,关于斑马鱼脾脏的研究报道较少,且多集中在毒性试验这部分,关于斑马鱼心脏和体肾的研究相对较多,但大多是从基因水平来探究心脏的的发育、内分泌情况以及肾脏疾病模型的建立。本研究则从形态学的角度来阐述和解读斑马鱼脾脏、心脏和体肾的组织构造以及微细结构,为相关病理毒理学研究等提供正常的形态学参考。试验Ⅰ 斑马鱼脾脏的微细结构应用光镜和透射电镜技术对斑马鱼脾脏的微细结构进行了观察分析。结果表明,斑马鱼脾脏实质由脾髓和网状组织两部分构成,脾髓分布于整个脾脏,包括白髓和红髓,但红、白髓界限不明显,呈混合分布。红髓染色较浅,面积较大,占脾实质的大部分区域,主要由密集的成熟与未成熟的红细胞构成,胞核呈深蓝色,胞质为浅红色。可见脾窦结构,脾窦内含大量血细胞,血细胞形态、大小不一,没有明显的壁结构。脾索结构不明显。白髓染色较深,主要由密集的淋巴细胞构成,胞核染色较深,呈深紫色。脾脏外表面有薄层的被膜覆盖,被膜为纤维性、无肌肉、也无致密小梁,被膜主要由外侧的间皮细胞和薄层结缔组织构成。电镜下,斑马鱼脾脏红髓面积相对较大,主要由密集的红细胞构成,除红细胞外,红髓内还有散在分布的血小板和浆细胞。白髓主要由淋巴细胞构成,还有巨噬细胞和单核细胞等很多与免疫相关的细胞分布。试验Ⅱ 斑马鱼心脏的微细结构应用光镜和透射电镜技术对斑马鱼心脏的微细结构进行了观察研究。结果表明,斑马鱼心脏由心室、心房、动脉球和静脉窦四部分构成。心室外观呈圆锥形,壁厚,肌肉发达,表面有心包膜覆盖。心室主要由发达的心肌纤维构成,心肌纤维的排列方向各不相同,彼此相连形成小梁,小梁与小梁之间又彼此相连形成多腔的网状结构以此构成心脏的支架。心房位于心室的右上方,壁薄腔大,内充满从全身各处回来的血液。心房壁主要由瘦长的排列稀疏的肌肉小梁(梳状肌)构成,小梁大多数起源于房室瓣,朝向壁外侧。动脉球外观呈梨形,主要由外膜层、中间层和内膜层三层构成。电镜下,心室分层明显,可分为心外膜区的致密层和心内膜区的海绵层或多孔层,致密层由纵向排列的扁平心肌纤维构成,海绵层由排列方向不一的扁平的心肌纤维构成。心房没有明显的分层现象,仅由疏松的海绵层构成,表面有薄层的被膜覆盖,被膜外表面有散在的小窝分布。与心室相比,心房内特殊颗粒的数量要远远多于心室内的特殊颗粒,心房内的间质细胞的数量也要比心室内的多,细胞类型较多。电镜下动脉球从里向外可分为内膜层、中间层和外膜层三层。内膜层通常被分割成指状立体型的嵴,主要由内皮细胞和平滑肌细胞构成,中间层主要由弹性纤维和平滑肌细胞构成,外膜层主要由薄层的间皮细胞和胶原蛋白构成,胶原蛋白主要分布在邻近动脉球外膜下的区域。试验Ⅲ 斑马鱼体肾的形态结构及其外泌体的分部鉴定应用免疫组化和免疫荧光以及透射电镜技术研究了斑马鱼体肾微细结构以及外泌体在体肾中的分布鉴定,结果显示体肾主要由肾单位和集合管构成,肾单位包括肾小体和肾小管,肾小体由肾小球和肾小囊组成,肾小管又分为颈段、近曲小管和远曲小管。通过碱性磷酸酶染色可见肾小管管腔的游离面有明显的刷状缘。电镜下可见刷状缘是由微绒毛构成,微绒毛的外观呈细长的管状。外泌体在肾小管管腔的游离面呈强阳性,肾小球和肾间质阳性较弱。电镜下,在肾小管游离面观察到了晚期内涵体的分布,肾小管的顶端有多泡体的分布,肾小球足细胞中也观察到了多泡体,而且体肾内不同部位的多泡体的电子密度不同,离游离面近的多泡体电子密度较低,靠近基底部的多泡体电子密度较高。试验Ⅱ 斑马鱼脾脏、心脏和体肾光镜与透射电镜样品的制备程序斑马鱼体型小,脾脏、心脏和体肾等器官取材和样品制备困难。本章节就实验中斑马鱼脾脏、心脏和体肾的取材及处理方法进行详细描述,旨在将斑马鱼相关器官的光镜和电镜样品处理程序化。研究内容包括透射电镜样品处理、染色,光镜样品处理、HE染色、Gordon Sweets网状纤维染色和酸性磷酸酶染色。通过上述处理,取得了理想的观测结果。有利于使斑马鱼器官的形态学观测样品处理的操作标准化,为斑马鱼在环境监测等领域的广泛应用提供标准化的操作步骤。