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第一部分分析急性冠脉综合征患者体内氯吡格雷活性代谢产物的影响因素目的:分析影响急性冠脉综合征(ACS)患者体内硫酸氢氯吡格雷活性代谢产物血浆浓度的主要因素。方法:105例ACS患者均给予阿司匹林100 mg·d-1及硫酸氢氯吡格雷75 mg·d-1,连续口服4 d;第5天晨起空腹给药1 h后,抽取静脉血4 m L,用乙二胺四乙酸抗凝。其中2 m L立即加入500 mmol·L-1的衍生化试剂2-溴-3’-甲氧基苯乙酮(MPB)溶液20μL,用于检测硫酸氢氯吡格雷活性代谢产物的浓度;另2 m L用于荧光检测细胞色素P450 2C19*2(CYP2C19*2)、*3和氧磷酶1(PON1)基因型。用单因素分析探索二分类变量及等级资料对硫酸氢氯吡格雷活性代谢产物血药浓度的影响,用Spearman分析探索硫酸氢氯吡格雷活性代谢产物血药浓度与连续性变量的相关性。结果:糖尿病、高脂血症、PON1携带、进行冠状动脉介入手术后与硫酸氢氯吡格雷活性代谢产物血药浓度呈负相关(P<0.05),β受体阻滞药、他汀类药物、血清白蛋白(ALB)与硫酸氢氯吡格雷活性代谢产物的浓度呈正相关(P<0.05)。结论:糖尿病、高脂血症、PON1携带及进行冠状动脉介入手术后等可减少硫酸氢氯吡格雷活性代谢产物血药浓度,而ALB以及合用β受体阻滞药或他汀类药物可增加其血药浓度。第二部分肠道菌群对硫酸氢氯吡格雷及其活性代谢产物在大鼠体内药动学的影响目的:建立大鼠血浆中硫酸氢氯吡格雷及其活性代谢产物的LC-MS/MS测定方法,并考察大鼠肠道菌群变化对其药代动力学的影响。方法:色谱及质谱条件:Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-1 m M乙酸铵(含0.1‰的甲酸)(80∶20,V/V),流速1m L·min-1,柱温40℃,进样量10μL,内标为盐酸噻氯匹定。离子化方式:电喷雾离子化源(ESI);检测方式:正离子模式;扫描方式:多反应监测(MRM);离子源喷射电压:5500 V;离子源温度:550℃;气帘气(CUR)压力:25 psi;雾化气NEB(GS1,N2)压力:55 psi;辅助气AUX(GS2,N2)压力:50 psi;碰撞气(CAD)压力:4 psi;硫酸氢氯吡格雷的去簇电压(DP)和碰撞能(CE)值分别为68 V和21 e V,活性代谢产物衍生物(CAMD)的DP和CE值分别为114 V和26 e V,盐酸噻氯匹定的DP和CE值分别为60 V和23 e V;用于定量分析的离子对分别为m/z 322.2→212.0(硫酸氢氯吡格雷),504.4→354.1(CAMD),264.2→154.1(盐酸噻氯匹定)。动物实验:24只SD大鼠随机分为益生菌组、抗生素组和对照组,每组8只。分别灌胃双歧杆菌乳杆菌三联活菌(0.8 g·kg-1)、阿莫西林克拉维酸钾(125 mg·kg-1)和蒸馏水,连续7天,每天一次。第8天每只大鼠给予硫酸氢氯吡格雷片(10 mg·kg-1),并于给药前和给药后5、10、20、30、45 min、1、1.5、2、4、6、8、10 h眼内眦取血,于肝素抗凝离心管(含20μL 125 m M 2-溴-3’-甲氧基苯乙酮(MPB)衍生化试剂),立即涡旋30 s混匀,离心取上层血浆200μL,加入600μL含1.5 ng·m L-1内标的乙腈溶液,涡旋1 min,10900 r·min-1离心5 min,取上清液10μL进样。采用DAS 2.1.1软件拟合大鼠的药动学参数,使用SPSS 21.0软件对三组药动学参数进行统计学分析,P值小于0.05则认为有统计学差异。结果:益生菌组、抗生素组和对照组硫酸氢氯吡格雷的主要药动学参数如下:AUC0-t分别为(6.83±1.81)、(6.80±1.75)和(6.50±1.87)ng·h·m L-1;AUC0-∞分别为(12.11±4.90)、(11.67±5.75)和(13.94±6.68)ng·h·m L-1;Cmax分别为(3.25±1.73)、(2.87±0.73)和(2.76±1.15)ng·m L-1;t1/2分别为(9.07±4.57)、(7.75±4.64)和(12.5±10.95)h;Tmax分别为(0.30±0.19)、(0.33±0.08)和(0.43±0.23)h;CL分别为(966.61±418.40)、(1000.34±366.34)和(836.05±303.94)L·(h·kg)-1;V分别为(11261.73±4270.92)、(9437.67±2945.94)和(11655.10±5789.74)L·kg-1。益生菌组、抗生素组和对照组CAMD的主要药动学参数如下:AUC0-t分别为(362.26±126.43)、(491.68±169.72)和(404.85±92.71)ng·h·m L-1;AUC0-∞分别为(404.85±92.71)、(1524.19±176.40)和(422.45±91.08)ng·h·m L-1;Cmax分别为(258.12±121.92)、(272.00±72.04)和(258.55±112.03)ng·m L-1;t1/2分别为(2.19±0.76)、(3.59±1.95)和(2.42±0.83)h;Tmax分别为(0.52±0.16)、(0.84±0.18)和(0.78±0.16)h;CL分别为(30.45±13.39)、(20.76±5.95)和(24.67±5.40)L·(h·kg)-1;V分别为(100.37±60.28)、(110.66±73.57)和(87.10±35.88)L·kg-1。使用SPSS 21.0进行统计学分析发现,与对照组相比益生菌组和抗生素组各药动学参数均没有统计学差异。结论:本实验建立了大鼠血浆中硫酸氢氯吡格雷及其活性代谢产物的LC-MS/MS测定方法。药动学实验结果表明肠道菌群的变化对硫酸氢氯吡格雷及其代谢产物的药代动力学无影响。第三部分肠道菌群对替格瑞洛在大鼠体内药动学的影响目的:建立大鼠血浆中替格瑞洛的LC-MS/MS测定方法,并考察大鼠肠道菌群变化对替格瑞洛药代动力学的影响。方法:色谱及质谱条件:Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-1‰的甲酸(80∶20,V/V),流速1 m L·min-1,柱温35℃,进样量10μL,内标为布洛芬。离子化方式:电喷雾离子化源(ESI);检测方式:负离子模式;扫描方式:多反应监测(MRM);离子源喷射电压:5500 V;离子源温度:600℃;气帘气(CUR)压力:40 psi;雾化气NEB(GS1,N2)压力:55 psi;辅助气AUX(GS2,N2)压力:50 psi;碰撞气(CAD)压力:10 psi;替格瑞洛的解离电压(DP)和碰撞能(CE)值分别为-111.36 V和-32.43 e V,布洛芬的DP和CE值分别为-49.61 V和-10.27 e V;用于定量分析的离子对分别为m/z 521.2→361.3(替格瑞洛),205.1→161.1(布洛芬)。动物实验:45只SD大鼠随机分为益生菌组、抗生素组和对照组,每组15只。分别灌胃双歧杆菌乳杆菌三联活菌(0.8 g·kg-1)、阿莫西林克拉维酸钾(125 mg·kg-1)和蒸馏水,连续7天,每天一次。第8天每只大鼠给予替格瑞洛(18 mg·kg-1),并于给药前和给药后5、15、30 min、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24 h眼内眦取血,于肝素抗凝离心管,离心取上层血浆200μL,加入600μL含150 ng·m L-1内标的乙腈溶液,涡旋1 min,10900 r·min-1离心10 min,取上清液10μL进样。采用DAS 2.1.1软件拟合大鼠的药动学参数,使用SPSS 21.0软件对三组药动学参数进行统计学分析,P值小于0.05则认为有统计学差异。。结果:益生菌组、抗生素组和对照组替格瑞洛的主要药动学参数如下:AUC0-t分别为(6336.24±1840.46)、(4444.05±1033.43)和(4469.32±928.47)ng·h·m L-1;AUC0-∞分别为(6841.98±1975.95)、(4656.66±1083.78)和(4736.47±897.42)ng·h·m L-1;Cmax分别为(858.65±275.98)、(648.81±215.59)和(617.49±168.95)ng·m L-1;t1/2分别为(6.40±2.18)、(5.25±1.39)和(5.68±2.08)h;Tmax分别为(0.88±0.23)、(0.90±0.21)和(1.30±0.59)h;CL分别为(2.82±0.72)、(4.07±0.99)和(3.95±0.91)L·(h·kg)-1;V分别为(26.07±12.00)、(31.45±14.65)和(32.95±14.17)L·kg-1。使用SPSS 21.0进行统计学分析发现,与对照组比较益生菌组的AUC0-t、AUC0-∞和Cmax增大,Tmax和CL减小(P值均小于0.05);抗生素组与对照组相比,药动学参数均没有统计学差异。结论:本研究建立了大鼠血浆中替格瑞洛的LC-MS/MS测定方法。药动学实验结果显示,口服益生菌使大鼠肠道菌群发生变化后,可增大替格瑞洛在大鼠体内的峰浓度,降低清除速率,增加替格瑞洛在大鼠体内的暴露量。