外源性肿瘤抗原MAGE-A9及MAGE-A11对食管癌裸鼠移植瘤生长的影响

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肿瘤免疫疗法作为继手术、放化疗后的抗癌新方法,其机理主要是激活机体自身生物防御机制对抗肿瘤细胞。筛选肿瘤特异性抗原是免疫治疗的关键。癌/睾丸抗原(cancer/testis antigen,CTA)因其表达模式的特异性而成为了理想的肿瘤免疫治疗靶点。CTA在多种肿瘤组织中具有广泛表达的特性,而在机体正常组织中仅在睾丸等生殖相关细胞中有表达,偶而在胎盘中有表达,但是睾丸与胎盘等生殖相关组织是免疫豁免器官,不会表达人类白细胞抗原HLA分子(human leukocyte antigen),也不会引起机体特异性的抗原抗体免疫反应。所以,CTA符合作为肿瘤特异性免疫治疗的靶向抗原。黑色素瘤抗原基因(Melanoma-associated antigen gene,MAGE)家族属于CTA中的一类,也表现为在人体正常的组织细胞中局限表达于在睾丸和胎盘等生殖相关组织细胞中,在其它正常机体组织中均不表达,而在肿瘤组织中却是高表达。鉴于MAGE家族成员不同的表达模式,MAGE可以家族分为两个亚类,即MAGE-I型抗原和MAGE-II型抗原。MAGE-I型抗原为特异性肿瘤抗原,其还可以分为三种亚类,即MAGE-A、MAGE-B和MAGE-C。而MAGE-A中又包含12个成员,MAGE-A1MAGE-A12。MAGE-II型抗原因其在人体所有正常组织细胞中普遍表达,故不能归属CTA的范畴。在MAGE家族所有的成员中,MAGE-A型抗原亚家族具有更高的肿瘤特异性。在本研究中,我们利用基因转染技术建立过表达MAGE-A9或MAGE-A11的人食管癌细胞,通过皮下种植方法构建食管癌裸鼠荷瘤模型,测量移植瘤生长过程中的瘤体积变化,绘制移植瘤生长曲线,实验结束时,处死荷瘤小鼠剥离移植瘤,并称量瘤体重量,以分析过表达MAGE-A9或MAGE-A11基因对裸鼠移植肿瘤生长发展的影响,同时通过小动物活体荧光成像系统检测过表达MAGE-A9或MAGE-A11的裸鼠移植瘤组织中GFP荧光蛋白激发的荧光能量情况,旨在探讨食管癌免疫治疗新的靶点MAGE-A9与MAGE-A11在活体移植瘤中的作用。目的:探讨外源性MAGE-A9和MAGE-A11基因对食管癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法:分别将过表达MAGE-A9和MAGE-A11基因的人食管癌细胞Eca109接种到裸鼠皮下,建立裸鼠移植瘤,检测移植瘤的生长情况,再利用小动物活体成像技术检测移植肿瘤荧光能量值,以反映裸鼠皮下移植瘤的活性;转染空白质粒的细胞株接种裸鼠建立的移植瘤模型作为对照。探讨MAGE-A9和MAGE-A11基因在人食管癌细胞中的作用。结果:1空载体转染对照组、p CMV6-AC-MAGE-A9-GFP组与p CMV6-AC-MAGE-A11-GFP组,转染成功率分别为:91.2%,92.06%,89.83%。2移植瘤最终空转对照组有1例没有成瘤,其他的移植瘤生长呈圆形或椭圆形,个别动物有两个或三个分散瘤体,移植瘤总体表面光滑。3移植瘤体积生长曲线显示空转对照组移植瘤于第15日开始逐渐增长,p CMV6-AC-MAGE-A9-GFP组与p CMV6-AC-MAGE-A11-GFP组的移植瘤在第10日就出现明显增长,整体生长趋势可见过表达MAGE-A9或MAGE-A11,对移植瘤生长都有明显的促进作用(P<0.01)。4空转对照组移植瘤重量0.29±0.046g,过表达MAGE-A9或MAGE-A11的移植瘤重量0.99±0.132g和0.69±0.072g,表明过表达这两个基因都对移植瘤生长都有明显的促进作用(P<0.01)。5空转对照组、p CMV6-AC-MAGE-A9-GFP组、p CMV6-AC-MAGE-A11-GFP组移植瘤荧光能量值分别为37.76±2.01、69.93±6.31、67.76±7.79(CPS×105)。活体成像实时图片显示过表达MAGE-A9和MAGE-A11基因的移植瘤荧光强度大于空转对照组。6与空转组相比,两个过表达组的MAGE-A9与MAGE-A11相对表达量(2-??CT)分别为3.46±0.29、6.06±0.64(P<0.005)。结论:外源性MAGE-A9和MAGE-A11促进了人食管癌细胞Eca109裸鼠移植瘤的生长。
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