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研究背景益气活血方宁心痛颗粒是治疗冠心病不稳定型心绞痛的院内中药自制制剂,临床疗效确切。前期动物实验亦证明,其可抑制炎症反应、调节血脂、稳定动脉粥样硬化易损斑块。而其具体的抗动脉粥样硬化的分子生物学机制仍有待进一步深入研究。目的观察益气活血方宁心痛颗粒及其组方中君药黄芪、臣药川芎主要活性成分(黄芪多糖、藁本内酯)对轻度氧化修饰低密度脂蛋白诱导的THP-1源性巨噬细胞“Toll样受体4-脾酪氨酸激酶”途径的干预作用,探讨益气活血方药稳定动脉粥样硬化易损斑块、抑制动脉粥样硬化进展的分子机制。方法将THP-1源性巨噬细胞分为空白组、模型组、宁心痛颗粒含药血清组及有效组分组(其中黄芪多糖与藁本内酯设高、中、低剂量组,并设空白血清组与含药血清组相比较)。采用轻度氧化修饰低密度脂蛋白(minimally modified low density lipoprotein/minimally oxidized low density lipoprotein,mmLDL)干预THP-1源性巨噬细胞,免疫印迹法检测脾酩氨酸激酶(spleen tyrosine kinase, Syk)、细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases, Erk1/2)、桩蛋白(Paxillin)磷酸化水平随时间变化情况;以及宁心痛颗粒含药血清及有效组分对mmLDL干预的THP-1源性巨噬细胞Syk、Erk、Paxillin蛋白磷酸化水平的影响;采用免疫沉淀联合免疫印迹法检测mmLDL干预的THP-1源性巨噬细胞Toll样受体4(Toll like receptor4, TLR4)蛋白磷酸化水平随时间变化情况,以及宁心痛颗粒含药血清及有效组分对mmLDL干预的THP-1源性巨噬细胞TLR4蛋白磷酸化水平的影响;采用中性红吞噬实验检测宁心痛颗粒含药血清及有效组分对mmLDL干预的THP-1源性巨噬细胞吞噬小分子物质功能的影响。采用激光共聚焦方法检测宁心痛颗粒含药血清及有效组分对mmLDL干预的THP-1源性巨噬细胞细胞骨架的影响。用Syk siRNA抑制THP-1源性巨噬细胞Syk的表达后,再重复上述实验。结果1宁心痛颗粒含药血清可抑制由mmLDL引发的THP-1源性巨噬细胞TLR4、Syk、ERK、 Paxillin蛋白磷酸化表达增高、吞噬小分子物质功能增强、细胞骨架改变。2黄芪多糖可抑制由mmLD引发的THP-1源性巨噬细胞TLR4、Syk、ERK、Paxillin蛋白磷酸化表达增高、吞噬小分子物质功能增强、细胞骨架改变。以黄芪多糖高剂量组的效果最为明显。3藁本内酯可抑制由mmLD引发的THP-1源性巨噬细胞TLR4、Syk、ERK、Paxillin蛋白磷酸化表达增高、吞噬小分子物质功能增强、细胞骨架改变。以藁本内酯高剂量组的效果最为明显。4宁心痛颗粒含药血清的上述作用强于黄芪多糖、藁本内酯以及黄芪多糖联合藁本内酯组。5采用Syk siRNA对以上指标均有抑制作用,并且宁心痛颗粒含药血清与其可产生协同作用。结论宁心痛颗粒含药血清及黄芪多糖、藁本内酯均可不同程度抑制由mmLDL引发的THP-1源性巨噬细胞TLR4/Syk/ERK/Paxillin蛋白磷酸化激活、吞噬小分子物质功能增强、细胞骨架改变,这可能是其抑制泡沫细胞形成、稳定易损斑块、抗动脉粥样硬化的部分作用机制。