miR-505-5p在膀胱癌中靶向调控PLK1抑制细胞增殖,迁移和诱导凋亡的机制研究

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目的:膀胱癌发病率在全世界恶性肿瘤中高居第十位,在男性恶性肿瘤中排第六。在中国,膀胱癌是泌尿系统最高发的恶性肿瘤,也是男性最易发的恶性肿瘤之一,其发病率正逐年增加。膀胱癌的发生发展机制尚未研究清楚,且生物学行为复杂,极易复发和转移。因此研究膀胱癌发病机理及影响其进展的因素对癌症治疗有着至关重要的作用。而polo-like kinase 1(PLK1)与包括膀胱癌在内的多种癌症的发生发展有密切的关系。其致癌基因作用已被广泛证实。此外,微小RNA广泛存在于生物体的各种细胞中,参与生命体生长发育的各个阶段。它在物种间的高度保守性证明其有着重要作用。目前已有许多研究报道微小RNA与膀胱癌的发生发展相关。因此可以推测微小RNA可能与PLK1共同参与调节膀胱癌的生物学进程,研究微小RNA与PLK1影响膀胱癌的生物学特性的方式,可以为理解膀胱癌发生进展和临床治疗提供新的思路。方法:1、收集28对膀胱癌及癌旁正常组织,用qRT-PCR实验检测PLK1的mRNA表达量。2、用生物信息学的方法预测miR-505-5p可能调控PLK1,同时验证miR-505-5p在组织中的表达量,然后用皮尔森相关分析与PLK1表达量是否相关。3、用双荧光素酶报告基因系统验证miR-505-5p与PLK1 mRNA的3’-非编码区的结合关系。4、在膀胱癌细胞(T24,UMUC3)中用脂质体转染miR-505-5p的模拟物(mimics)上调其表达量,转染抑制剂(inhibitor)下调其表达量,并用其阴性对照(NC)为参照,用蛋白印记验证miR-505-5p对PLK1蛋白的调控作用。5、CCK-8实验验证miR-505-5p对膀胱癌细胞增殖能力的影响。6、Transwell实验被用于验证miR-505-5p对细胞的迁移能力的影响。7、流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响。8、过表达PLK1,验证其是否可以消除miR-505-5p对膀胱癌细胞生物学行为的影响。结果:1、PLK1在膀胱癌组织中的表达量明显高于癌旁正常组织(n=28,P<0.001)。2、miR-505-5p在膀胱癌组织中的表达量则明显低于癌旁正常组织(n=28,P<0.001)。皮尔森相关分析揭示miR-505-5p的表达量与PLK1表达量呈负相关(r=-0.593,P<0.001)。3、共转染miR-505-5p与PLK1 3’-UTR野生型质粒的细胞较共转染对照和PLK13’-UTR野生型质粒的细胞相对荧光活性下降,而PLK1 3’-UTR突变组的对照与miR-505-5p之间的荧光活性差别无统计学意义。4、与对照组相比,上调miR-505-5p,膀胱癌细胞中PLK1的蛋白表达量下降;下调miR-505-5p,PLK1的蛋白表达量上升。5、CCK-8实验结果显示:上调miR-505-5p,细胞的光密度值(OD)较对照组降低,下调miR-505-5p,细胞的光密度值较对照组增高。6、与各自的对照组相比,上调miR-505-5p,细胞相对迁移数量减少,下调miR-505-5p,则细胞相对迁移数量增加。7、上调miR-505-5p,细胞凋亡率较对照组上升,下调miR-505-5p,细胞凋亡率较对照组下降。8、过表达PLK1能消除上述的miR-505-5p对膀胱癌细胞生物学特性的影响。结论:1、PLK1在膀胱癌中高表达,miR-505-5p在其中低表达。两表达量呈负相关。2、miR-505-5p能通过靶向作用于PLK1 mRNA的3’-非编码区,抑制PLK1蛋白表达,从而抑制膀胱癌细胞增殖,迁移和诱导细胞凋亡。
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