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变形杆菌(Proteus)属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae),革兰氏阴性菌。变形杆菌广泛存在于自然环境中及动物的肠道中。变形杆菌具有多形性,运动活泼,有迁徙生长现象。变形杆菌属于条件致病菌,是导致泌尿系统感染的常见致病菌,也可引起食物中毒。
多数变形杆菌的O抗原化学结构已被破译。变形杆菌O抗原基因簇的研究,对于解析变形杆菌O抗原多样性的形成机制具有重要作用。O抗原特异基因均存在于O抗原基因簇中,基于特异基因的特异分子标识的筛选,为变形杆菌分子分型系统的建立奠定基础。
本研究利用变形杆菌基因簇两侧的持家基因上的引物扩增7株变形杆菌的O抗原基因簇;用鸟枪法构建O抗原基因簇文库;用ABI3730测序仪对插入片断进行测序;运用生物信息学方法对序列进行拼接,预测开放阅读框,并对基因功能进行分析,进一步通过PCR方法鉴定了这些变形杆菌的血清型特异基因及特异引物。
经分析发现,7株变形杆菌的O抗原基因簇均位于cpxA基因和secB基因之间。cpxA到甲基转移酶基因按照5’-3’的方向转录。其余基因按照3’-5’的方向转录。变形杆菌O抗原基因簇的平均CG含量较低,在30%~33%之间。变形杆菌O抗原基因簇中的基因与其O抗原结构相对应,并具有多样性。变形杆菌的O抗原基因簇中均包含ugd、甲基转移酶基因、丝氨酸乙酰基转移酶基因以及NAD(P)H依赖的甘油-3-磷酸脱氢酶基因。通过实验鉴定了特异基因wzy,基于该基因的引物经验证可作为特异分子标识,为分子分型方法的建立提供了基础。