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肌纤维类型在决定肌肉生长和肉质方面起着重要作用,不同纤维类型肌球蛋白重链(MyHC)基因,如MyHC slow.MyHC 2a.MyHC 2x和MyHC 2b,是目前公认的区分不同肌肉纤维类型的分子标记,因此发现调控不同肌纤维类型MyHC基因表达的基因及其分子机制,对提高瘦肉产量和品质具有重要意义。FHL3蛋白属于LIM超家族,可通过与MyoD.CREB等重要蛋白相互作用参与调节肌细胞分化、细胞骨架形成以及下游基因表达。但有关FHL3是否调控MyHC基因表达尚不清楚。本研究以小鼠C2C12成肌细胞为模型,研究干涉FHL3基因后不同纤维类型MyHCmRNA水平上的表达变化。具体结果如下：1、通过荧光实时定量PCR和Western Blotting技术研究了FHL3基因和MyHCl、2a、2x和2b基因在细胞分化0h、48h、96h和144h的变化情况：在成肌细胞向肌管分化过程中,FHL3基因表达量逐渐减少,而MyHC slow基因在肌管形成初期表达量急剧增加,肌管完全形成后又有所下降；MyHC 2a基因随着细胞的分化表达量逐步增加,在肌管形成后表达量最高；MyHC 2b和MyHC 2x基因也是随着细胞的分化表达量增加,但分化前期变化较小,到肌管基本形成时期表达量陡增。2、利用siRNA小片段进行干扰试验,筛选出其中的siRNAs#3对FHL3的干涉效果较好。并用siRNA #3转染C2C12细胞,转染24h后分化24h、48h、72h,结果分化24h和48h细胞的FHL3相对表达量显著降低。3、利用siRNA #3转染C2C12细胞,转染24h后分化72h,结果显示MyHC slow和MyHC 2a的表达量显著降低,MyHC 2x的表达却显著升高而MyHC 2b的表达无显著性变化。而用siRNA #3转染C2C12细胞,转染48h后分化48h,结果MyHC show表达量显著降低,MyHC 2b和MyHC 2x的表达量显著增加,而MyHC 2a表达降低不明显。比较以上结果发现,其中MyHC slow和MyHC 2x在两种处理的表达变化较一致。4、利用siRNA#3转染分别分化24h、48h和72h的C2C12细胞,转染后继续分化48h,结果分化24h和48h细胞的FHL3的表达量分别显著和极显著降低,对应的MyHC slow和MyHC 2a的表达量也均显著和极显著降低。与以上结果比较发现,MyHC slow的表达量均随FHL3表达的降低而降低。本试验结果显示在C2C12细胞中降低FHL3对MyHC基因有显著的影响,FHL3对MyHC 2b和MyHC 2x有负调节作用,对MyHC slow和MyHC 2a有正调节作用。本研究为进一步阐述FHL3如何调节MyHC基因的表达提供了重要的线索,其作用机理还有待进一步研究。