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系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)是我国一种病理类型较为常见的肾脏疾病,系膜细胞增殖是一种常见的各种肾小球疾病的共同病理变化,研究证实肾小球硬化的发生最主要的原因就是系膜细胞增殖分泌的炎症介质及细胞外基质沉积。西医治疗多局限应用糖皮质激素,免疫抑制剂等,副作用较大且易复发。近年来中医药在该疾病应用疗效凸显,特别是以黄芪、水蛭为代表的益气化瘀药物为主,已有大量文献报道其在抑制系膜细胞增殖方面的应用。 国内外学者研究表明,系膜细胞的增殖与核转录因子(NF-κB)激活及细胞外基质的降解受到抑制息息相关;基质金属蛋白酶(MMPs)系统是一个重要的调节ECM降解的酶系统;Fas/FasL系统是近年来研究比较多的一种参与调控各种细胞凋亡的基因。本实验拟从NF-κB、MMP-2、Fas/Fasl等因子入手探讨黄芪、水蛭含药血清及有效成分抑制系膜细胞增殖的机理。 目的:研究黄芪、水蛭含药血清及有效成分对脂多糖(LPS)诱导的系膜细胞增殖中NF-κB、MMP-2、Fas/Fasl的表达影响,探讨黄芪、水蛭含药血清及有效成分抑制系膜细胞增殖的可能机理。 方法:LPS诱导大鼠系膜细胞(HBEH)增殖,采用黄芪多糖、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮、水蛭素及黄芪水蛭复方含药血清进行干预,24小时后收集细胞,采用CCK-8法观察各单体及含药血清对HBEH的增殖抑制率, Real time PCR法测定NF-κB、MMP-2、Fas/FaslmRNA的表达变化。 结果:1.Real time PCR法显示:LPS诱导系膜细胞增殖后,模型组NF-κBmRNA表达与正常组比较显著增加(P<0.05),而黄芪高血清组、水蛭高血清组、黄芪高水蛭高血清组、黄芪低水蛭高血清组与模型组比NF-κBmRNA表达水平均明显降低(P<0.01)。而黄芪高水蛭高血清组与黄芪低水蛭高血清组、水蛭高血清组相比P<0.05。可以看出,各含药血清组均可以不同程度的抑制NF-κBmRNA表达水平;各含药血清组之间相比,黄芪高水蛭高血清组效果优于黄芪低水蛭高血清组和水蛭高血清组。 2.Real time PCR法显示:LPS诱导系膜细胞增殖后,模型组MMP-2mRNA表达与正常组比较显著增加(P<0.05),而黄芪高血清组、水蛭高血清组、黄芪高水蛭高血清组、黄芪低水蛭高血清组与模型组比MMP-2mRNA表达水平均明显降低(P<0.01)。而黄芪高血清组、黄芪高水蛭高血清组、黄芪低水蛭高血清组各组与水蛭高血清组相比P<0.05。可以看出,各含药血清组均可以不同程度的抑制MMP-2mRNA表达水平;各含药血清组之间相比,黄芪高血清组、黄芪高水蛭高血清组、黄芪低水蛭高血清组的效果优于水蛭高血清组。 3.Real time PCR法显示:LPS诱导系膜细胞增殖后,模型组FASmRNA表达与正常组比较显著增加(P<0.05),而黄芪高血清组、水蛭高血清组、黄芪高水蛭高血清组、黄芪低水蛭高血清组与模型组比FASmRNA表达水平均明显降低(P<0.01)。可以看出,各含药血清组均可以不同程度的抑制FASmRNA表达水平;各含药血清组之间比较没有明显差别,P>0.05无统计学意义。 4.Real time PCR法显示:LPS诱导系膜细胞增殖后,模型组FASL mRNA表达与正常组比较显著增加(P<0.05),而黄芪高血清组、水蛭高血清组、黄芪高水蛭高血清组、黄芪低水蛭高血清组与模型组比FASL mRNA表达水平均明显降低(P<0.01)。可以看出,各含药血清组均可以不同程度的抑制FASLmRNA表达水平;各含药血清组之间比较没有明显差别,P>0.05无统计学意义 5.Real time PCR法显示:LPS诱导系膜细胞增殖后,FAS mRNA表达明显升高,为正常细胞的2.51倍(与正常组比较,p<0.05),各单体组FAS mRNA表达量与LPS组相比均有显著的下降(与LPS组比较,p<0.01)。可以看出,各单体组均可以不同程度的抑制FASmRNA表达水平;各单体组之间比较没有明显差别,P>0.05无统计学意义 6.Real time PCR法显示:LPS诱导系膜细胞增殖后,FASLmRNA表达明显升高,为正常细胞的3.34倍(与正常组比较,p<0.05),各单体组FASLmRNA表达量与LPS组相比均有显著的下降(与LPS组比较,p<0.01)。可以看出,各单体组均可以不同程度的抑制FASLmRNA表达水平;各单体组之间比较没有明显差别,P>0.05无统计学意义 结论:1.各血清组均可降低LPS诱导HEBH增殖后NF-κBmRNA高表达,其中黄芪高水蛭高血清组效果优于其余各组。 2.各血清组均明显降低LPS诱导HEBH增殖后MMP-2mRNA高表达,其中黄芪高血清组、黄芪高水蛭高血清组、黄芪低水蛭高血清组的效果优于水蛭高血清组。 3.各血清组均可降低LPS诱导HEBH增殖后FasmRNA高表达,各血清组两两比较无统计学意义。 4.各血清组均可降低LPS诱导HEBH增殖后FaslmRNA高表达,各血清组两两比较无统计学意义。 5.各单体组均可降低LPS诱导HEBH增殖后FasmRNA高表达,各单体组两两比较无统计学意义。 6.各单体组均可降低LPS诱导HEBH增殖后Fasl mRNA高表达,各单体组两两比较无统计学意义。