目的:研究非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)患者血清抵抗素(resistin)水平、肝组织抵抗素表达情况及其与胰岛素抵抗(insulin resistance, IR)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)水平及肝组织病理改变(脂肪变性、炎症、纤维化)的关系,旨在揭示抵抗素在NAFLD发病机制中的作用及地位,为NAFLD的预防及治疗提供新的思路。方法: 2006年7月~2007年6月于我院就诊的NAFLD患者47例,符合中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组2006年2月修订的NAFLD临床诊断标准,其中16例经病理证实。根据有无ALT升高或病理结果,分为非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis, NASH)组及单纯性脂肪肝组。对照组20例,其中健康献血员15例,行肝血管瘤切除术者5例。所有研究对象均测量身高及体重,计算体重指数(body mass index, BMI)=体重(kg)/身高(m)2;用日本Olympus AU2700全自动生化分析仪检测血清ALT及空腹血糖(fasting blood glucose, FBG)水平;用放射免疫法测定空腹血清胰岛素(fasting insulin, FINS)水平,采用稳态模式评估法(homeostasis model assessment, HOMA)计算胰岛素抵抗指数,HOMA-IR=FINS×FBG/22.5,取自然对数后成为正态分布;用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法测定血清抵抗素、TNF-α浓度。HE染色观察肝组织普通病理变化,计算脂肪变性肝细胞百分比,炎症活动度根据美国NASH临床研究协会病理学委员会2005年制定的NAFLD组织学评分系统进行评分;Masson染色观察肝组织纤维化的程度;采用Power VisionTM二步法对肝组织进行抵抗素及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle action,α-SMA)免疫组化染色。用多功能病理图象分析仪测定胶原纤维及抵抗素表达面积百分比,20倍物镜下计算平均面密度(阳性面积与统计场面积百分比)。应用SPSS 13.0统计软件分析实验数据。结果:1 BMI、生化指标及血清抵抗素浓度:单纯性脂肪肝组及NASH组BMI及HOMA-IR显著高于对照组(P <0.01),而单纯性脂肪肝组与NASH组之间差异无统计学意义(P >0.05);NASH组血清ALT、TNF-α水平显著高于单纯性脂肪肝组及对照组(P <0.01),单纯性脂肪肝组与对照组之间差异无统计学意义(P >0.05);血清抵抗素浓度在三组各不相同,从高到低依次为NASH组、单纯性脂肪肝组、对照组(P <0.01)。2肝组织病理学变化:单纯性脂肪肝组患者肝细胞存在不同程度脂肪变性;NASH组患者肝组织存在肝细胞脂肪变性,小叶内有炎性细胞浸润、点状或灶性坏死,有窦周纤维化,汇管区可见炎性细胞浸润,向小叶内延伸,偶见P-V桥接坏死。3肝组织抵抗素表达:肝组织免疫组化染色可见抵抗素主要表达于肝窦周细胞,炎性坏死区域及汇管区也有表达。NASH组肝组织抵抗素表达量显著高于单纯性脂肪肝组及对照组(P <0.01),单纯性脂肪肝组与对照组之间差异无统计学意义(P >0.05)。4相关性分析:在所有NAFLD患者,血清抵抗素浓度与BMI、HOMA-IR、ALT及TNF-α水平呈显著正相关,相关系数r分别为0.472、0.481、0.852、0.790,P值均<0.01;在行病理检查的NAFLD患者中,肝组织抵抗素表达量与血清抵抗素浓度、ALT、TNF-α、HOMA-IR、肝组织炎症活动度及胶原纤维含量呈正相关,相关系数r分别为0.932、0.937、0.806、0.453、0.968、0.965,P值均<0.05,与BMI及肝脂变程度不相关(P >0.05)。对行病理检查的NAFLD患者,采用多元逐步回归法,以肝组织炎症(Y)为应变量,以肝组织抵抗素表达量(X1)、血清抵抗素浓度(X2)、BMI(X3)、HOMA-IR(X4)及血清TNF-α浓度(X5)为自变量建立回归方程,在0.05水准,只有肝组织抵抗素表达量进入方程,Y=-0.151+96.124X1,R2=0.937,说明NAFLD患者肝组织局部表达的抵抗素是肝组织炎症的独立危险因素。以肝组织胶原纤维含量(Y)为应变量,以肝组织抵抗素表达量(X1)、血清抵抗素浓度(X2)、BMI(X3)、HOMA-IR(X4)及血清TNF-α浓度(X5)为自变量建立回归方程,在0.05水准,肝组织抵抗素表达量及血清TNF-α浓度进入方程,Y=-0.016+0.742X1+0.017X5,R2=0.968。说明NAFLD患者肝组织局部表达的抵抗素与肝组织纤维化的发生密切相关。结论:1 NAFLD的发生与肥胖及IR相关,TNF-α在NASH发生中起重要作用。2血清抵抗素浓度从高到低依次为NASH组、单纯性脂肪肝组、对照组,并且与BMI、HOMA-IR、ALT及TNF-α水平呈显著正相关,抵抗素在NAFLD的发生发展中起重要作用。3抵抗素表达于肝组织,主要表达于肝窦周细胞,炎症坏死区域及汇管区也有表达。抵抗素表达量在NASH组患者肝组织显著高于单纯性脂肪肝组及对照组,并与肝组织炎症活动度及胶原纤维含量呈正相关,表明肝组织局部产生的抵抗素参与NAFLD肝组织炎症、纤维化的发生与发展。4 NAFLD患者肝组织局部表达的抵抗素是肝组织炎症的独立危险因素,与肝组织纤维化的发生密切相关。