日本血吸虫可溶性虫卵抗原免疫小鼠DC亚群对哮喘抑制作用的实验研究

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目的通过过继转移日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫小鼠树突状细胞(DC)亚群,探讨SEA免疫的DC亚群在抑制过敏性哮喘中的作用及可能的作用机制。方法BALB/c小鼠经腹腔及足垫注射SEA50μg/只,每周1次,共4次。对照组注射生理盐水。用抗体包被的免疫磁珠分离小鼠脾CD11c+CD8α+DC与CD11c+CD8α-DC亚群。另取30只BALB/c小鼠,随机分为6组,A组为正常对照组(SCN),B组为单纯哮喘组(SNO),C组为过继转移盐水对照CD11c+CD8α+DC组(AA), D组为过继转移盐水对照CD11c+CD8α-DC组(AB),E组为过继转移SEA免疫CD11c+CD8α+DC组(SA),F组为过继转移SEA免疫CD11c+CD8α-DC组(SB)。C、D组小鼠分别经尾静脉过继转移5×105个盐水对照CD11c+CD8α+DC和’5x105个盐水对照CD11c+CD8α-DC; E、F组小鼠分别经尾静脉过继转移SEA免疫5×105个CD11c+CD8α+DC和5×105个SEA免疫CD11c+CD8α-T>C。1h后B、C、D、E、F组小鼠同时用卵白蛋白(OVA)诱发哮喘,4周后剖杀,取肺组织,做病理切片,经苏木精-伊红(HE)染色,光镜下观察肺组织炎症变化;收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)进行嗜酸性粒细胞(EOS)计数及细胞因子IL-4、IL-5、IL-10、IL-12、转化生长因子β(TGF-β)检测;收集血清检测OVA特异性IgE抗体水平;收集脾细胞培养上清(SPC)进行细胞因子IL-4、IL-5、IL-10、IL-12、TGF-β检测。结果肺组织病理切片HE染色结果显示,与B、C、D、E组相比,F组小鼠肺组织炎症明显减轻,肺组织病理学总评分有统计学意义(P<0.05);A、B、C、D、E、F六组小鼠BALF中EOS计数百分比分别为(8.40±1.14)、(40.00±3.39)、(23.67±4.62)、(25.20±3.19)、(20.33±3.22)和(13.00±1.58),与B、C、D、E组比较,F组EOS数目明显减少(P<0.05);A、B、C、D、E、F六组小鼠血清OVA特异性IgE水平分别为(204.90±3.58)pg/ml、(1127.83±18.86)pg/ml、(1097.03±25.80)pg/ml、(1097.08±17.23)pg/ml、(1039.78±2.90)pg/ml、(319.33±3.97)pg/ml,与B、C、D、E组比较,F组IgE水平显著下降(P<0.05); A、B、C、D、E、F六组小鼠BALF中IL-4分泌水平分别为(10.17±4.49)pg/ml、(80.36±10.94)pg/ml、(67.83±6.81)pg/ml、(62.41±4.02)pg/ml、(57.33±11.82)pg/ml、(22.36±7.62)pg/ml、IL-5分泌水平分别为(17.13±7.33)pg/ml、(1471.24±56.15)pg/ml、(823.37±6.52)pg/ml、(833.18±35.46)pg/ml、(811.16±11.61)pg/ml、(313.77±2.97)pg/ml; IL-10分泌水平分别为(120.79±21.48)pg/ml、(72.77±17.60)pg/ml、(81.63±9.08)pg/ml、(82.80±2394)pg/ml、(106.94±26.31)pg/ml、(248.89±33.20)pg/ml; IL-12分泌水平分别为(50.37±1.53)pg/ml,(46.70±7.00)pg/ml、(122.37±16.01)pg/ml、(136.45±9.67)pg/ml、(140.53±4.81)pg/ml、(340.95±22.22)pg/ml; TGF-P分泌水平分别为(176.91±51.25)pg/ml、(190.09±20.64)pg/mk (109.64±34.71)pg/ml、(162.27±38.95)pg/ml、(220.09±25.00)pg/ml、(966.82±57.48)pg/ml、与B、C、D、E组比较,F组IL-4、IL-5水平明显降低(P<0.05), IL-10、IL-12、TGF-β水平显著升高(P<0.05)。A、B、C、D、E、F六组小鼠SPC中IL-4分泌水平分别为(17.77±7.66)pg/ml、(248.77±18.85)pg/ml、(220.51±11.84)pg/ml、(217.13±50.37)pg/ml、(172.70±27.81)pg/ml、(76.90±14.92)pg/m;IL-5分泌水平分别为(12.13±2.96)pg/ml、(1770.84±27.50)pg/ml、(1082.34±78.44)pg/ml、(1124.81±22.62)pg/ml、(1058.96±38.68)pg/ml、(451.16±15.72)pg/ml; IL-10分泌水平分别为(122.88±16.81)pg/ml、(131.10±11.52)pg/ml、(161.21±1.80)pg/ml、(204.91±8.71)pg/ml、(220.90±26.86)pg/ml、(998.81±138.46)pg/ml; IL-12分泌水平分别为(14.03±5.13)pg/ml、(66.03+2.31)pg/ml、(75.03±14.01)pg/ml、(132.20±22.69)pg/ml、(179.53±16.74)pg/mk (405.70±57.66)pg/ml; TGF-β分泌水平分别为(128.05l±14.79)pg/ml、(102.14±46.03)pg/ml、(168.27±60.69)pg/ml、(183.27±79.13)pg/ml、(160.55±29.64)pg/ml、(1101.55±73.60)pg/ml;与B、C、D、E组比较,F组IL-4、IL-5水平明显降低(P<0.05), IL-10、IL-12、TGF-β水平显著升高(P<0.05)。结论日本血吸虫SEA免疫的DC亚群对过敏性哮喘有抑制作用,该抑制作用主要通过CD8α-DC亚群产生。
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