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免疫层析方法由于简单、快速、灵敏度高、特异性强、成本低等特点,被广泛应用于现场快速检测。然而传统的胶体金免疫层析方法往往受限于肉眼定性的判读模式,需通过肉眼观察检测线的有无来判断检测结果,检测结果易受检测者主观因素影响。基于读取仪判读模式的免疫层析技术因其操作简便、灵敏度高、数据可储存可上传等特点,近年来已成为研究热点。本研究旨在建立基于胶体金试纸条读取仪的胶体金免疫层析方法快速半定量检测方法,对猪尿及牛肉中盐酸克伦特罗残留进行半定量检测。借助胶体金读取仪获取数据以消除环境因素以及检测者主观因素影响。在此基础上,本研究还以大肠杆菌O157:H7为研究对象,系统性地比较了基于四种标记物(胶体金、量子点、荧光微球和铕-荧光微球)的免疫层析定量检测方法。为了验证本研究所建立的基于半定量模式的胶体金免疫层析方法检测猪尿及牛肉样本的实际应用价值,本研究采集了不同地区的256个经ELISA方法确证不含盐酸克伦特罗的阴性猪尿样本进行加标检测,分析其阴/阳性点分布以及假阴性率和假阳性率;同时,对80个加标牛肉样本进行盲样检测,分析其假阴性率和假阳性率。结果发现灵敏度点附近的假阳性/假阴性率相对较高,而阴性样本未检出假阳性,强阳性样本未出现漏检。实验结果为基于读取仪模式的胶体金免疫层析方法应用于实际样本检测提供了参考依据。近年来,基于新型的具有光致发光特性的纳米粒子为标记物的免疫层析方法成为研究热点。由于光致发光纳米粒子具有独特的发光性质,以其作为标记物的免疫层析方法的灵敏度能得到有效地提升。本研究系统性地比较了以胶体金、量子点、荧光微球和铕-荧光微球作为标记物的免疫层析检测方法定量检测牛奶中大肠杆菌O157:H7。确定了四种免疫层析方法的最优工艺参数。结果显示,所建立的四种免疫层析检测方法的灵敏度分别为:胶体金免疫层析检测方法(GNPICA,2.5×104 CFU/m L)、量子点免疫层析检测方法(QD-ICA,5×103 CFU/mL)、荧光微球免疫层析检测方法(FNP-ICA,1.0×103 CFU/mL)、基于铕-荧光微球的时间分辨免疫层析检测方法(EuNP-ICA,5.0×102 CFU/mL),EuNP-ICA的灵敏度最高。单个胶体金免疫层析试纸条、量子点免疫层析试纸条、荧光微球免疫层析试纸条和基于铕-荧光微球的时间分辨免疫层析试纸条的抗体消耗量分别为:0.16μg、0.37μg、0.04μg和0.10μg,变异系数范围分别为7.4%–15.8%、10.4%–18.6%、2.7%–7.8%和6.9%–10.5%。FNP-ICA在抗体标记时大肠杆菌O157:H7单克隆抗体用量最少,且在样本检测时变异系数最小。不仅如此,四种免疫层析检测方法的线性范围分别为:GNP-ICA(1.0×104–1.0×106 CFU/mL)、QD-ICA(2.5×103–1.0×106 CFU/mL)、FNP-ICA(2.5×102–2.5×105 CFU/mL)、EuNP-ICA(2.5×102–2.5×105 CFU/mL),FNP-ICA和EuNP-ICA线性范围比GNP-ICA和QD-ICA更宽。而且,FNP-ICA和EuNP-ICA对牛奶基质的耐受性能比GNP-ICA和QD-ICA更好。通过本研究发现,构建的FNP-ICA和EuNP-ICA在检测牛奶中可能存在的致病菌方面有更好的应用前景。