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高尿酸血症及痛风是现代常见病之一,是由于长期的高血尿酸水平所引起的,多发于中老年男性与绝经后女性,近年来有年轻化的趋势。在人体新陈代谢的过程中,由人体自身核酸和ATP降解产生及从食物中摄取的嘌呤类物质经过腺苷转氨酶(ADA)作用生成次黄嘌呤,而次黄嘌呤经过黄嘌呤氧化酶(XOD)转化成黄嘌呤并最终生成尿酸。血尿酸水平过高除会引起痛风外,还与癌症,高血压,糖尿病之间具有一定的关联性。现今针对高尿酸血症及痛风的药物往往具有较大的毒副作用,因此开发一种安全有效的防治痛风的药物具有一定的社会意义。本文旨在通过现代生物控制酶解技术开发功能性活性肽,首先建立了一种完整、高效、准确的XOD体外抑制活性检测方法;再以营养丰富的海洋鱼蛋白为原料,制备出具有良好抗痛风活性的功能性多肽;并深入探讨了海洋鱼酶解产物的体内降尿酸活性及其机理进行探讨,为抗痛风药物和保健品的研制、开发提供进一步的理论和方法指导。利用XOD酶解黄嘌呤的产物尿酸在290nm处具有特征吸收峰的特点,运用高效液相色谱法(HPLC)对XOD体外抑制反应体系(将150μL 0.4mmol/L黄嘌呤溶液与50μL待测样品在25℃下温浴3 min,加入50μL 0.05U/LXOD启动反应,反应25 min后加入50μL 1mol/L HCl终止反应,用超纯水稀释10倍后过0.22μL滤膜,进行液相测定)各组分进行分离,通过检测尿酸含量来表征待测样品的XOD抑制活性,确定的最优检测条件为:流动相为0.015mol/L NH4H2PO4:甲醇=85:15,流速为1 m L/min,检测波长为290 nm。选取富含蛋白和不饱和脂肪酸的优质海洋鱼肉作为原料,利用中性蛋白酶和胰酶进行复合酶解。以蛋白回收率和XOD抑制率为评价指标,运用响应面法优化酶解工艺,确定最佳制备工艺为:在pH=7.0和55℃条件下,料液比为1:2,总酶添加量为0.29%(其中中性蛋白酶占56%,胰酶占44%),酶解5.99 h。选取采用最优酶解工艺制得的海洋鱼酶解产物对氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症大鼠进行降尿酸活性试验,研究证明海洋鱼酶解产物具有显著降尿酸活性,不仅能够有效抑制大鼠体内XOD活性,并降低大鼠肝脏细胞中ADA和XOD两种酶的mRNA表达量。通过研究发现,海洋鱼酶解产物主要是通过减少ADA和XOD的含量及抑制XOD活性来实现降低尿酸水平的目的;并且能够有效降低高尿酸血症小鼠的血清肌酐和尿素氮水平,具有一定的肾脏保护功效。