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目的:口臭是呼吸时口腔产生的不良气味,据调查中国人群口臭的发病率约为27%[1]。口臭的发生与细菌产生的挥发性硫化物(Volatile Sulfur Compounds,VSC)有关,具核梭杆菌(Fusobacterium nuleatum Fn)牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis Pg)为公认的口臭致病菌。柠檬精油(Lemon essential oil LEO)有独特的芳香气味和显著的抑菌作用,在医学研究中很受关注。本研究拟检测LEO对Pg、Fn的生长、黏附及细菌产酸的影响。进一步研究使用不同浓度LEO后致病菌产生VSC的变化,及细菌产臭相关基因的表达的影响,以评估LEO在口臭患者治疗中的潜在效用。方法:1.应用蒸馏联合酶促法提取LEO。2.检测LEO对Fn、Pg生长的影响,测定LEO对Pg、Fn的最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC)3.构建细菌体外生物膜模型,检测LEO对Pg、Fn及口臭患者全唾液菌黏附的影响。4.测定培养液用药前后Pg、Fn的上清液p H值的变化,检测LEO对细菌产酸能力的影响。5.Halimeter检测使用不同浓度LEO后致病菌产生VSC的变化。6.采用RT-q PCR方法测定LEO对Fn产臭相关基因cdl、fom A表达量的变化。7.PCR测定亚抑菌浓度LEO0.563mg/ml对口臭患者唾液混合菌中Fn,Pg比例的影响。8.临床实验评估口臭危险因素及LEO漱口水对口臭患者的影响。结果:1.柠檬果皮640g提取LEO 9.4 ml。2.48h肉汤稀释法LEO对Fn生长有抑制作用,MIC为4.5 mg/ml。9 mg/ml的LEO对Pg+Fn生长有抑制作用。48h实验组及对照组均未见Pg生长,72h时LEO对Pg生长有抑制作用,MIC为9 mg/ml3.72h LEO在9 mg/ml至2.25 mg/m浓度对Pg、Fn+Pg光滑平面上的黏附均有抑制作用。2.25mg/ml与4.5mg/ml的LEO对Pg黏附的抑制效果强于Fn+Pg。48h未发现LEO对Fn光滑平面上的黏附有抑制效果。4.亚抑菌浓度的LEO(2.25 mg/ml至0.563 mg/ml)抑制Pg的产酸,但对Fn的产酸不产生作用。5.48h亚抑菌浓度的LEO(2.25 mg/ml至0.563 mg/ml)对Fn的产气量随着LEO浓度的降低抑制作用也降低。48 h亚抑菌浓度(2.25 mg/ml至1.125 mg/ml)的LEO对Fn+Pg产气量有抑制效果。LEO对Fn产气量的抑制效果强于Fn+Pg。72h亚抑菌浓度LEO(2.25 mg/ml至0.563 mg/m)对Pg产气有抑制作用,作用无浓度依赖性。6.亚抑菌浓度(2.25 mg/ml)的LEO抑制Fn的fom A基因表达,仅在(代谢旺盛期)16 h及48 h抑制Fn的cdl基因的表达。7.24 h与48 h,9 mg/ml的LEO对唾液混合细菌生长有抑制效果(P<0.05),亚抑菌浓度(4.5 mg/ml至1.125 mg/ml)的LEO对唾液混合细菌黏附有抑制效果(P<0.05)。应用LEO0.563mg/ml后Fn、Pg在唾液混合菌中比例下降。8.临床研究结果显示OR与VSC、牙龈出血指数(BI)、舌苔指数(TI)、智齿数目之间具有明显的正相关(r VSC=0.859;r BI=0.429;r TI=0.572;r智齿=0.259,P<0.01;P<0.05)。OR与牙周探诊深度(PD)、龋失补(DMF)之间没有相关性(r PD=0.245;r DMF=0.125,P>0.05)。VSC与PD、BI、TI、智齿数目之间有显著相关性(r PD=0.386;r BI=0.429;r TI=0.649;r智齿=0.429,P<0.01)。应用亚抑菌浓度0.563 mg/ml LEO漱口水后,在30min至45min内VSC降低。持续时间长于双氧水(30min)。结论:1.LEO可以抑制Fn、Pg、Fn+Pg及唾液混合菌的生长,黏附;减低Fn、Pg、Fn+Pg的产气值(VSC)。2.舌苔、探诊出血指数、智齿数目与口臭感官测量值相关;VSC与牙周袋深度、舌苔、探诊出血指数、智齿数目正相关。LEO漱口水效果可以改善口臭患者感官感受,减低患者口臭测量值。