宫颈癌(CC)是妇女最常见的恶性肿瘤之一，现已确认高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)是宫颈癌形成最重要的危险因子，99.7％的浸润性宫颈癌中可以检测到HR-HPV的存在。因此，通过高危HPV的检测来筛查易患人群，追踪HPV感染状态，随访HPV是否被清除，是预防宫颈癌发生的关键。但并非所有感染HPV的患者都会发展为宫颈癌，仅检测到患者感染了HPV而不进一步检查就无法了解宫颈病变的程度和发展趋势。人宫颈癌基因(HCCR，包括HCCR-1和HCCR-2两种)在宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌中呈高表达，在正常对照组不表达，因此如果通过对宫颈癌病因学因素HPV和生物标志物因素HCCR的联合检测，来对宫颈癌高危人群进行筛查，可能具有重要意义。本研究对41例宫颈液基细胞残液及相应的组织学标本应用原位杂交法检测HPV16/18，并用免疫组化法检测HCCR，以探讨二者在子宫颈癌发生发展中的生物学意义及临床应用价值，试图为提高宫颈癌易患人群检出率，进而为宫颈癌的预警和早期诊断提供更科学有效的方法，达到早诊早治，降低宫颈癌发病率死亡率的目的：并为开发简便易得的分子筛查技术资源提供理论基础。 材料和方法: 1、材料 (1)研究对象 570例宫颈液基细胞学残液标本，均经LCT(Liquid-based Cytology Test，LCT系统)诊为宫颈上皮内瘤变及宫颈癌，来自2005年11月～2006年11月中国医科大学附属第一医院妇科。年龄19～76岁，平均48.53岁。无宫颈手术史、未孕、无盆腔放射治疗史。本研究组取其中经活检或切除后具有相应组织学标本者31例，并随机选取6例炎症和4例正常标本作为对照，年龄25～68岁，平均年龄46.7岁。其中宫颈癌组6例、CINⅡ/Ⅲ组14例、CINI组11例、炎症组6例(包括形态学诊为HPV感染和炎症的病例)、正常对照组4例。细胞学分组以相应组织学诊断为分组依据。 (2)主要试剂、仪器和来源HPV原位杂交试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。HCCR蛋白兔抗人多克隆抗体由韩国Jin Woo Kim教授惠赠(本抗体是针对HCCR-1和HCCR-2相同C-末端氨基酸序列的多克隆抗体，具有较好的特异性)。DAB显色试剂盒和免疫组化S-P试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。 2、方法 (1)免疫组织化学染色：用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化法(S-P法)检测HCCR的表达。结果判定：HCCR蛋白定位于胞浆，胞浆内见棕黄色颗粒为阳性。由3名有经验的病理医师在双盲法下独立计数。细胞涂片主要计数有病变的细胞，异常宫颈上皮细胞着色大于10％则判定为阳性标本<[5]>。细胞片和组织片在光镜下根据着色范围分为：阳性细胞数小于10～24％为(+)；阳性细胞数25～49％为(++)；阳性细胞数50～74％为(+++)；阳性细胞数大于75％为(++++)。 (2)原位杂交：检测HPVl6/18 DNA的表达。细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性。阳性细胞数小于25％为(+)；阳性细胞数25％～49％为(++)；阳性细胞数50％～74％为(+++)；阳性细胞数75％～100％为(++++)。 (3)统计学分析：对所得结果各组间采用x<2>检验及Fishers确切概率法检验，P<0.05有统计学意义；用Spearman等级相关分析检验：HPV16/18感染与HCCR表达的关系，P<0.05有统计学意义。 结论: 1、HCCR和HPV16/18在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中，随着病变程度的加重而检出率增高。 2、HCCR的表达和HPV16/18的感染在宫颈病变中呈正相关，二者联合检测可提高宫颈病变筛查的准确度。 3、无论是HCCR还是HPV16/18，在宫颈液基细胞学残液和相应组织中的检测结果都是基本一致的，利用宫颈液基细胞学残液对宫颈癌进行筛查具有很大的可行性。