论文部分内容阅读
目的:通过对广西虎纹捕鸟蛛毒成分进行氨基酸测定,以及红外、紫外光谱法定性分析,初步鉴定蛛毒的化学成分;并对其药理作用作体外实验,研究毒素对人胶质瘤细胞的凋亡的影响,以及对细胞中Caspase-3和Bcl-2/Bax的表达影响。 方法:1化学成分的初步定性分析采用氨基酸自动分析仪对蛛毒的多种氨基酸成分进行定性及定量的研究,并且辅以紫外、红外光谱法进行定性研究,初步鉴定蛛毒的化学成分。2抗肿瘤活性的研究采用MTT法、流式分析法、Caspase-3活性测定法测定HWZD对U251人脑胶质瘤细胞的增殖作用的影响。3 HWZD对 U251人脑胶质瘤细胞凋亡相关基因表达的影响采用RT-PCR技术测定HWZD对U251人脑胶质瘤细胞抑癌基因bax,癌基因bcl-2表达的影响。 结果:1采用氨基酸自动分析仪对蛛毒的多种氨基酸成分进行定性及定量的研究,结果表明该鉴别方法操作简便、专属性强,可用于蛛毒的定性鉴别和含量测定;利用紫外-可见光谱、红外光谱法对蛛毒样品进行光谱鉴别研究,显示蛛毒具有一定的光谱特征。2 MTT法表明HWZD对U251细胞均有显著抑制作用(P<0.05或P<0.01),具有剂量依赖性。HWZD剂量为37.5、50、75、100、150mg/L时,对U251细胞的增殖有显著性抑制作用(P<0.05或P<0.01),IC50为53.48 mg/L。流式细胞仪分析法表明HWZD对U251细胞具有显著性凋亡作用,并有浓度依赖和时效关系。在剂量为150 mg/L,并诱导48h,细胞早期凋亡率84.1%,晚期凋亡率4.48%。Caspase-3活性测定表明HWZD在150 mg/L时对细胞中的执行分子Caspase-3的激活速度快,活化程度为9.23并存在剂量依赖关系。3 HWZD在浓度为50、75、100 mg/L时均显著增强基因bax的表达水平(P<0.05或P<0.01)。HWZD在浓度为50、75、100mg/L时均显著降低癌基因bcl-2的表达水平(P<0.05或P<0.01)。 结论:1初步建立了HWZD成分的定性鉴定研究方法;2 HWZD对U251细胞株的增殖有明显的抑制作用;3 HWZD能够显著增强抑癌基因bax的表达,其抗肿瘤作用可能与上调bax表达相关;HWZD能够显著降低癌基因bcl-2的表达,其抗肿瘤作用可能与下调癌基因bcl-2表达相关。