紫外线照射下Mn(Ⅱ)、Ni(Ⅱ)、NaVO3及靛玉红、青蒿素与牛血清白蛋白的相互作用研究

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本论文用紫外-可见吸收光谱(UV-Vis)、紫外二阶导数光谱、傅立叶红外光谱(FT-IR)、荧光猝灭光谱研究了紫外线(UV C 253.7 nm)照射下Mn(Ⅱ)、Ni(Ⅱ)、NaVO3及靛玉红、青蒿素与牛血清白蛋白的相互作用。第一章,综述了血清白蛋白的结构、功能及光谱性质;金属离子、药物分子与血清白蛋白相互作用的光谱法研究进展;紫外线的利弊及紫外线照射下金属离子、药物等小分子与血清白蛋白的相互作用研究现状及前景。第二章,利用紫外-可见吸收光谱、紫外二阶导数光谱和荧光猝灭光谱研究了生理pH条件、紫外光照射下金属离子Mn(Ⅱ)、Ni(Ⅱ)与BSA的结合情况。随紫外线照射时间的延长,紫外-可见吸收光谱和紫外二阶导数光谱的特征峰发生位移及峰值呈现有规律的变化,说明BSA的氨基酸微环境发生了一些变化。荧光猝灭光谱显示,经紫外线照射后,在[金属离子]/[BSA]≈1处出现一拐点,说明BSA与金属离子结合仍有两类结合位点,且没有改变其强结合位点的位置。在Ni(Ⅱ)-BSA体系中,[金属离子]/[BSA]>1时,照射过的BSA加入金属离子后,BSA与金属离子结合的荧光猝灭常数(Kq)和结合常数(Ks)随紫外线照射时间的延长而逐渐降低,照射30 mins的Kq比未照射的Kq降低15.12%,Ks降低20.47%;而BSA与金属离子先混合后照射时,BSA与金属离子结合的Kq、Ks却逐渐升高,照射30 mins的Kq比未照射的Kq升高95.41%,Ks升高8.69%。在[金属离子]/[BSA]<1时,两种情况的Kq、Ks都逐渐升高。第三章,用荧光光谱和紫外-可见吸收光谱法研究了在模拟人体生理条件、紫外线照射下偏钒酸钠(NaVO3)与牛血清白蛋白(BSA)结合反应的特征。紫外-可见吸收光谱显示,加入NaVO3后,BSA的紫外-可见吸收值降低,表明NaVO3与BSA形成了缔合物。荧光猝灭光谱显示NaVO3对BSA有较强的荧光猝灭作用,荧光猝灭机理符合静态机制。缔合物的稳定常数分别为:Ks=0.357×104 (25℃),Ks=0.667×104 (30℃),Ks=1.437×104 (35℃)。F?rster偶极-偶极非辐射能量转移机理确定NaVO3在BSA中与第214位色氨酸残基之间的距离R=1.0695 nm(25℃),R=1.0782 nm(30℃),R=1.0806 nm(35℃)。第四章,利用紫外-可见吸收光谱、傅立叶红外光谱、荧光猝灭光谱和非辐射能量转移理论研究了模拟人体生理条件、紫外线照射下药物靛玉红、青蒿素与BSA的相互作用及共存离子对药物与BSA结合的影响。探讨了药物对BSA的猝灭机理,两者的结合区域,相互作用类型,求出了两者的结合常数及一些热力学参数。结果显示,两种药物都对BSA有较强的荧光猝灭作用,属于静态猝灭机制;药物与BSA结合在蛋白质的Ⅱ区域;且药物的紫外-可见吸收光谱和BSA的荧光发射光谱有一定的重叠;用Stern-Volmer、Lineweaver-Burk双倒数方程和非辐射能量转移理论求出了两者的荧光猝灭常数和结合常数及作用距离;两者的结合类型主要为疏水作用同时也伴随着静电引力作用;药物与BSA的混合物加入共存离子后,共存离子与药物竞争的结果,减小了BSA与药物的结合常数,这样便减小了药物与蛋白的结合力,缩短了药物在血浆中的储留时间,增加了药物的最大作用强度;经紫外线UV C照射后,药物与BSA的结合作用降低,对研究紫外线影响药物在体内的储存、转运及作用强度的变化有重要的指导意义。
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