樟子松Pin m III基因的克隆与功能分析

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农作物的产量和分布依赖于外界环境条件,由于外界环境的多变性和不确定性:从而影响到作物的产量。其中低温寒害是一种严重的自然灾害,故提高农作物的抗寒抗冻性具有重要意义,目前随着对植物寒害机理、抗寒冻的深入研究,已发现了多种抗冻基因,使得植物在抗寒冻基因工程中的研究与应用得到了广泛开展。本研究在早期的实验基础上发现了Pin m Ⅲ蛋白,知道此蛋白是PR-10家族的员,并且在植物体应答外界环境的胁迫时PR (pathogenesis related protein)蛋白就会产生并积累。近年来大量PR蛋白被鉴定,根据它们本身的特性可分为17个功能家族。PR10蛋白是一类分子量为16-19kD的酸性蛋白具有核酸酶相似结构,具有核酸酶活性和体外抗菌活性,因此在植物防御外界环境的变换过程中起重要作用。将樟子松抗冻蛋白基因Pin m Ⅲ亚克隆至super1300GFP中,构建成单价植物表达载体super1300GFP-Pin m Ⅲ,转化至农杆菌GV3101中,利用农杆菌介导法转化拟南芥。通过PCR、western检测表明抗冻蛋白基因已整合至拟南芥基因组中,并发生了转录。对T4代转基因植株经行4℃冷处理48h,转基因植株的Pin m Ⅲ蛋白表达量高于野生型。研究证明,转化后的植株比野生型具有明显的抗寒能力,该结果为冷敏感经济作物在生育期中免遭受霜害冻害提供了理论依据。
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