本研究以荷斯坦高产奶牛的颗粒细胞、耳缘成纤维细胞和输卵管上皮细胞为供核细胞，对牛的无透明带卵母细胞体细胞核移植的影响因素进行了探讨，优化了牛的无透明带卵母细胞核移植技术方案，为进一步进行转基因牛和分离牛的胚胎干细胞的研究奠定了基础。实验主要结果如下： 1.手工去核后无透明带重构胚的细胞总数显著少于显微挤压去核方法(124.40vs194.0)(P<0.05)。 2.去核后两个半卵粘合交流电压降低能显著提高其随后的融合率，在交流电压为3V时，卵母细胞融合率显著高于其它两组(55.51％vs72.17％vs93.83％)(P<0.05)。 3.A23187+6-DMAP激活方法得到的无透明带重构胚分裂率和囊胚率显著高于Ionomycin+6-DMAP激活法(88.7％vs43.6％，37.4％vs19.9％)(P<0.05)。 4.融合到激活的间隔时间分别选择1h、2h和3h，分裂率和囊胚率之间没有显著差异(88.05％vs78.79％vs76.62％，31.45％vs43.29％vs32.95％)(P>0.05)。 5.无透明带重构胚在mCR1aa与CR1aa中的分裂率显著高于SOFaaci(83.17％和65.56％vs37.85％)(P<0.05)。 6.真空蠕动泵抽吸法和切割法得到的COCs总数显著高于注射器抽吸得到的COCs的总数(360和361vs219)，且切割法得到的1～2级COCs的数量显著高于另外两种方法(233vs86和208)(P<0.05)。 7.采用不同代数的耳缘成纤维细胞进行核移植，第6代和第10代的成纤维细胞进行核移植得到的分裂率显著高于第17代(80.26％和93.1％vs33.96％)(P<0.05)。 8.分别取高产奶牛的耳缘成纤维细胞、颗粒细胞和输卵管上皮细胞的第6代作为供体细胞进行核移植，所得的胚胎分裂率及囊胚率均无显著差异(89.12％vs80.26％,vs79.12％，33.65％vs25.77％vs21.19％)(P>0.05)。 9.颗粒细胞的冷冻处理组进行核移植得到重构胚的分裂率和囊胚率与不冷冻组之间没有显著差异(78.61％vs89.12％，29.42％vs33.65％)(P>0.05)。 10.冷冻的和新鲜的颗粒细胞的三级损伤细胞比例差异显著(5.91％vs1.35％)(P<0.05)。