论文部分内容阅读
鸡CD8+T细胞介导的细胞毒性T细胞(CTL)免疫应答在清除病毒感染过程中起着至关重要的作用。在CTL免疫应答过程中,TCR首先识别MHCI分子抗原多肽复合物,然后与辅助受体CD8分子形成TCR-pMHCI-CD8复合体来有效活化T细胞。但迄今为止,有关鸡CTL免疫的研究很少,尤其是CTL免疫反应中共受体CD8分子的精细结构,鸡MHCI分子BF2与CD8的相关病毒的CTL表位系统尚未见报道。鸡T细胞分布有别于哺乳动物,其γδT细胞约占到50%。因此,鸡的T细胞免疫具有重要的研究价值。为了填补鸡CTL免疫应答相关精细结构的研究的空白,本研究结合分子生物学和结构生物学的方法解析了鸡T细胞共受体分子CD8aa同源二聚体以及B15品系和B4品系鸡CD8αα/pBF2*1501和CD8αα/pBF2*0401复合体结构。CD8αα (cCD8aa)同源二聚体具有典型的IgV结构域,其与哺乳动物CD8αα比的保守氨基酸绝大多数位于形成二聚体的p折叠上。与已有CD8结构的比较分析证实CD8αα二聚体形成方式在进化过程中是保守的。cCD8αα主要功能区CDR loop有着明显的种属特异性,预示着其结合BF2分子的特征区别于哺乳动物。随后,CD8αα/pBF2*1501和CD8αα/pBF20401复合体结构分析揭示了pBF2-CD8αα种属特异性的相互作用特征：cCD8αα两个亚基与BF2分子的作用相当,cCD8α链的C"D环参与结合BF2分子,BF2与CD8αα的亲和力显著高于于哺乳动物等特征。此外,还发现BF2*1501或BF2*0401分了与cCD8αα的相互作用,在作用力的数量、作用的位点和两者之间亲和力方面两者存在明显的差异。此外,与未结合CD8的pBF2复合物比较发现,cCD8αα分子的结合并不影响BF2分了与多肤的结合以及递呈,但是会造成抗原结合槽表面多肽侧链的偏移和BF2分了α3区域以及β2m的整体偏移。马立克病毒和流感病毒的多肤RY0808(RRREQTDY)和RRE (RREVHTYY)与蛋白免疫佐剂HSP108-N333和弗氏免疫佐剂混合免疫SPF鸡之后,通过四聚体技术和流式细胞术,定量检测分别来源于多肽RY0808(RRREQTDY)和RRE(RREVHTYY)免疫鸡产生的特异性CD8+T细胞,并分选到了约106个的细胞。随后对特异性的α/βTCR基因进行了克隆、测序及多态性分析,并在体外获得了稳定的αβTCR异源二聚体可溶性蛋白和蛋白晶体,为进一步研究αβTCR相关结构与功能奠定了基础。总之,鸡CD8αα/pBF2复合物结构的解析,阐释了BF2分子与CD8分了相互作用的种属特异性特征,以及不同品系鸡BF2分子与CD8分子相互作用的种内差异。此外,还揭示了CD8αα同源二聚体的种属特征,阐明并验证了BF2分子递呈RY0808多肽的特征。综上所述,本研究首次从结构生物学角度闸释了CD8分子与BF2分子相互作用特征、递呈抗原肽特点以及引发CTL免疫应答的结构机制。