栀子豉汤神经保护作用及其化学物质基础研究

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栀子豉汤为张仲景《伤寒论》中的经典复方方剂,由中药材栀子和淡豆豉组成,其临床上可用于治疗失眠、抑郁症、神经性衰弱等心理性亚健康疾病。复方中的栀子为茜草科植物山栀Gardenia jasminoides Ellis.的干燥果实,淡豆豉为豆科植物大豆Glycine max(L.)Merr.的成熟种子经青蒿、桑叶等中药闷至发酵而成的加工制品,作为常用性中药材,在历版中国药典中均有详细记载。目前国内外多以栀子或淡豆豉单味药材的化学成分以及药理药效为基础展开研究,关于栀子豉汤复方药材的化学成分、药效物质以及配伍意义的研究报道甚少。首先本课题在细胞层面上对栀子豉汤复方的药理作用进行了研究,考察了不同浓度谷氨酸对于PC12细胞损伤模型存活率的影响,采用MTT法测定细胞存活率,确定了当谷氨酸浓度为3 mmol/L时,细胞损伤率达52%,为PC12细胞损伤模型的造模条件。随后考察了系列不同浓度的栀子豉汤对于模型组细胞的保护作用,确定了0.25、0.5和1 mg/mL浓度的栀子豉汤对于PC12细胞损伤模型具有明显的保护作用。根据对正常组细胞、谷氨酸模型组细胞以及栀子豉汤给药组细胞分别进行乳酸脱氢酶释放、谷胱甘肽还原酶水平、总超氧化物歧化酶活性、以及活性氧的检测,说明谷氨酸模型组可以增加乳酸脱氢酶的释放量、显著性降低谷胱甘肽还原酶和总超氧化物歧化酶的活力,并增强了细胞内活性氧的水平。而系列浓度栀子豉汤给药组则可以显著性降低乳酸脱氢酶释放量、增加细胞内谷胱甘肽含量、增强细胞内总超氧化物歧化酶活力并明显降低活性氧水平,从而抑制细胞损伤。由此说明栀子豉汤复方对于谷氨酸致PC12细胞的损伤模型具有明显的保护作用,为后续深入的研究栀子豉汤复方的化学成分分析及阐明配伍意义提供有力的实验数据。为充分研究栀子豉汤复方中的指标性成分,基于前期工作对栀子的活性成分进行了充分的探讨,因此本课题采用指纹图谱结合化学统计学的方法建立一种淡豆豉药材质量控制的方法,并对淡豆豉中特征性成分进行定性和定量分析。根据淡豆豉药材指纹图谱中相似度评价结果并结合聚类分析确定指纹图谱的色谱峰中对于淡豆豉质量具有明显干预作用的成分,采用离子阱-飞行时间质谱对21种化学成分进行定性分析。通过主成分分析和正交校正的偏最小二乘分析的统计学方法甄别出定性的色谱峰中对淡豆豉质量具有统计学影响意义的化学成分进行定量分析,共定量11种化合物,分别为黄豆苷,黄豆黄苷,染料木苷,大豆苷元,丙二酰黄豆黄苷,乙酰化黄豆苷,乙酰化黄豆黄苷,丙二酰染料木苷,乙酰化染料木苷,染料木素和黄豆黄素。为进一步探讨栀子豉汤化学物质基础研究,本课题又比较了栀子豉汤配伍前后化学成分的变化,采用离子阱-飞行时间质谱法分别对栀子豉汤复方以及栀子、淡豆豉两种单味药材进行定性鉴别分析和比较,发现栀子豉汤中缺少西红花苷III、京尼平、3,5-二-O-咖啡酰基-4-O-(3-羟基-3甲基)戊二酰基奎宁酸化学成分,同时淡豆豉中含量较少的化学成分包括香豆酸、丙二酰黄豆苷、丙二酰黄豆黄素、丙二酰染料木苷、乙酰化染料木苷也未在栀子豉汤中检测出来,但是复方中定性出Jasminoside A和Jasminoside I,以及未知化合物m/z 611.1643和m/z 663.3227,并未在单味药材中鉴别得到。此外,考察了栀子豉汤配伍比例对主要活性成分溶出变化的影响,分别对不同配伍条件的栀子豉汤复方中17种特征化学成分进行含量测定。确定栀子与淡豆豉比例为1:1时,为最佳配伍条件,该条件下栀子豉汤复方中环烯醚萜类、异黄酮类等活性成分溶出为最佳。
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