结直肠癌是最常见的消化系统恶性肿瘤,它的发病率位于恶性肿瘤的第三位,病死率位于恶性肿瘤的第四位。侵袭性生长、复发和转移是造成死亡的重要原因。研究表明肿瘤细胞发生的EMT现象在这一过程中起到了重要的作用。上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition）,简称EMT,指的是上皮细胞性的癌细胞发生了向成纤维细胞或间充质细胞表型的转变,表现为细胞极性消失,细胞骨架重排,并且迁移运动能力增加的现象。在生理状态下,EMT转换在胚胎发育过程中具有十分重要的地位。在胚胎发育过程中出现最早的EMT转换是在原肠胚形成期时发生的间质细胞形成和中胚层形成事件。正常组织在受损的情况下,也会在损伤部位的上皮细胞发生EMT的转化,从而完成损伤修复过程。由于EMT的发生,细胞表现为极性的丧失,黏附性降低,迁移能力增强。同时细胞表型发生改变,上皮表型丧失,如E-cadherin、细胞角蛋白。E-cadherin水平下降可导致细胞黏附力降低,从而细胞获得侵袭和转移的能力,E-cadherin表达的丢失已经被认为是EMT最显著的特征。同时细胞获得间质表型,如Vimentin、N-cadherin等表达升高。在胚胎发育过程中出现最早的目前已经发现的可以促进肿瘤细胞发生EMT的因子有很多,通过促进肿瘤细胞表达EMT相关因子而实现其形态学改变。但在结直肠癌中ZNF326是否具有类似的作用尚未见文献报道。ZNF326最初是在果蝇中被发现并认为对果蝇的神经细胞分化起到了重要的作用。它的本质是一个具有C2H2-锌指结构域、可能发挥转录因子作用的蛋白分子。ZNF326的主要功能域包括:近N端的转录激活区域（1-124aa）,242-260aa之间的核内定位序列（NLS）,中央区域包含两个C2H2-锌指结构域（分别位于313-336aa,407-430aa）。目前,ZNF326在结直肠癌中如何表达以及其发挥生物学行为是否与EMT有关引起我们极大的研究兴趣。目的:本研究旨在探讨ZNF326在结直肠癌与癌旁组织中的表达差异,及其与临床病理因素之间的关系;探讨ZNF326如何调节结直肠癌细胞迁移和侵袭能力。研究方法:通过免疫组织化学方法检测ZNF326在结直肠癌组织和正常结直肠黏膜组织中的表达差异并分析与临床病理因素之间的关系。在结直肠癌细胞系中双向调控ZNF326蛋白表达,通过免疫印迹实验、Real-time PCR、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验等方法,探讨ZNF326对结直肠癌细胞的迁移、侵袭能力的影响。利用染色质免疫共沉淀方法明确ZNF326与靶基因LTBP4的具体结合序列。回复实验来佐证以上实验结果。结果:1.结直肠癌组织中,ZNF326在细胞核中高表达（阳性率70.3%,109/155）,并且显著高于癌旁正常结直肠黏膜组织（阳性率23.2%,36/155）。ZNF326高表达与高TNM分期、低分化和淋巴结转移呈正相关。2.在SW480和SW620细胞系中,转染ZNF326质粒能够促进细胞的迁移和侵袭能力。而在CL187和RKO细胞系中敲除ZNF326则作用相反。3.ZNF326能够调控EMT相关因子的表达。过表达ZNF326能够显著上调Ncadherin、Vimentin、Snail和Slug的蛋白表达水平,而下调E-cadherin和ZO-1的蛋白表达水平;相反地,敲除ZNF326能够下调N-cadherin、Vimentin、Snail和Slug的蛋白表达水平,上调E-cadherin和ZO-1的蛋白表达水平。4.ZNF326可作为转录激活因子,通过与LTBP4（Latent transforming growth factor beta binding protein 4）启动子区（-934—-658）结合并启动LTBP4的转录活性。5.ZNF326调控LTBP4促进结直肠癌细胞的迁移、侵袭。我们检测了改变ZNF326的表达后对LTBP4和TGF-β通路关键分子（p-Smad2/3、Smad2/3）的变化。WB结果发现:过表达ZNF326能够显著上调LTBP4和p-Smad2/3的表达水平,Smad2/3的表达水平不变;相反地,敲除ZNF326能够下调LTBP4和p-Smad2/3的表达水平,Smad2/3的表达水平不变。我们通过免疫组化和PCR结果证实ZNF326与LTBP4在结直肠癌中的表达存在着正相关的关系。共转染ZNF326和si LTBP4后,EMT相关因子表达变化不明显。结论:1.ZNF326在结直肠癌细胞核中表达,其高表达与结直肠癌患者TNM分期,分化和淋巴结转移相关。2.过表达ZNF326能够促进结直肠癌细胞的迁移和侵袭。3.ZNF326通过调控LTBP4促进结直肠癌细胞的迁移、侵袭。