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池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)产于日本滋贺县的琵琶湖,比其它淡水珍珠蚌具有更好的抗病能力。本研究以淡水贝池蝶蚌为实验对象采用RACE PCR方法获得了其亲环素蛋白家族(Cyps)中CyPD、CyPC和CyPH的cDNA基因全长:池蝶蚌CyPD基因cDNA(Gen Bank注册号:KJ747387。)全长为2671bp,5’-非翻译区(Untranslated Region,UTR)80bp,其中3’-UTR 1487bp包括一个多聚腺苷信号AAATAA和Poly(A)尾巴,1104bp的开放性阅读框(Open reading frame,ORF)编码367个氨基酸,分子量约为41.09kDa,理论等电点pI=5.43;池蝶蚌CyPC基因cDNA全长为2050bp,5’-UTR 89bp,其中3’-UTR 500bp包括一个多聚腺苷信号AAAATAA和Poly(A)尾巴,1461bp的ORF编码486个氨基酸,分子量约为55.93kDa,理论等电点pI=6.07;池蝶蚌CyPH基因cDNA(Gen Bank注册号为KJ747386。)全长为761bp,5’-UTR 70bp,其中3’-UTR 151bp包括一个多聚腺苷信号AAAATAA和Poly(A)尾巴,ORF 540bp编码179个氨基酸,分子量约为19.66kDa,理论等电点pI=7.60。生物信息学分析表明,CyPD、CyPC和CyPH具有典型的亲环素肽酰脯氨酸顺反异构酶蛋白功能域,同时构建的系统进化树表明在进化地位上也相当保守。用CyPB基因完整的ORF与pET-32a构建pET-32a-CyPB重组表达载体,将重组质粒导入表达菌BL21(DE3)中进行原核表达,发现IPTG成功诱导了分子量约为40kDa的HsCyPB蛋白;结果还显示蛋白主要存在于上清中,因而利用镍离子亲和层析法纯化上清获得单一的融合蛋白。纯化的HsCyPB作为抗原免疫日本大白兔制备的多克隆抗体,抗体的效价高达1:512000,说明获得效价很高的抗体,而且Western blot检测结果表明制备的多克隆抗体具有很好的特异性;利用HsCyPB的抗体对池蝶蚌肝脏冰冻切片进行免疫荧光定位,发现HsCyPB蛋白在细胞质和细胞膜上都有表达。荧光定量PCR结果发现CyPA、CyPB在池蝶蚌的八个组织中均有表达,并且在肝脏中表达量最高,其次是在肠和性腺,血中的表达量最低;根据池蝶蚌CyPA、CyPB基因的cDNA全长序列,构建含有完整开放阅读框(ORF)的pEGFP-C1-CyPA、pEGFP-C1-CyPB表达载体;在转染实验过程中,人肝癌细胞(HePG2)作为实验细胞,pEGFP-C1质粒作为对照组A,pEGFP-C1-CyPA作为实验组B,pEGFP-C1-CyPB作为实验组C,pEGFP-C1-CyPA+pEGFP-C1-CyPB作为实验组D,利用转染试剂将对照组和实验组质粒分别转染到人肝癌细胞(HePG2)中进行真核表达,细胞在培养36h后在共聚焦显微镜中发现实验组的荧光明显比对照组多,同时在流式细胞仪检测中发现实验组额荧光比对照组强的多,于此预测池蝶蚌CyPA、B对人肝癌细胞(HePG2)生长有促进作用。