糖基化终末产物对体外培养牛眼小梁细胞氧化应激及凋亡的影响

来源 :山东省第十九次眼科学学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:minlu123
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目的:通过观察糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对体外培养牛眼小梁细胞的增殖及凋亡的影响,研究糖基化终末产物与原发性开角型青光眼(Primary open angle glaucoma, PO AG)之间的关系,进一步探讨糖尿病患者易并发原发性开角型青光眼的可能发病机制。方法:组织块培养法培养牛眼小梁细胞,形态学及免疫学(NSE、Ⅷ因子和FN的表达)进行细胞鉴定,证实小梁细胞的外胚神经层神经嵴间充质来源。取第三代处于对数生长期的牛眼小梁细胞,应用不同浓度的糖基化终末产物AGEs (0μg/ml、50μg /ml、100μg/ml、200μg/ml)培养液处理细胞96 h;终浓度的糖基化终末产物AGEs (200μg/ml)培养液处理细胞不同时间(48 h、72 h、96h)。应用噻唑兰[3-(4,5-Dimethylthylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT]比色法测定不同浓度糖基化终末产物AGEs对牛眼小梁细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测不同浓度糖基化终末产物AGEs及相同浓度糖基化终末产物AGEs不同作用时间对牛眼小梁细胞凋亡的影响;活性氧荧光探针2’7’-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)产生水平。结果:体外组织块法培养牛眼小梁细胞NSE、FN染色为阳性,Ⅷ因子染色为阴性,第二代细胞在接种的第三天进入对数生长期,持续三天左右。MTT法显示随糖基化终末产物AGEs浓度的增加,牛眼小梁细胞增殖能力明显受抑制,统计学分析有意义(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,糖基化终末产物AGEs可引起牛眼小梁细胞的凋亡及诱导牛眼小梁细胞内活性氧生成增多,且随浓度的增加及作用时间的延长,小梁细胞凋亡率增大,细胞内活性氧产生增多,统计学分析有意义(P<0.05)。结论:传代后三天左右的对数生长期细胞形态学较稳定、生长状态良好,适用于实验研究。体外培养条件下,糖基化终末产物AGEs对牛眼小梁细胞的增殖有明显的抑制作用,可引起细胞内活性氧的产生增加及诱导其凋亡。
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