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第一部分不同剂量PDX对急性肺损伤的影响目的:在脓毒症小鼠中,使用不同剂量的保护素DX（Protectin DX,PDX）,观察其对小鼠急性肺损伤的影响。方法:动物实验的实施采用雄性6-8周的C57小鼠,选取28只,将其随机平均分为4组:（1）假手术组（Sham）:小鼠假手术,用剪刀切开小鼠腹腔,缝合各层,1h后,取100μl PBS,腹腔注射小鼠体内;（2）脓毒症（CLP）组:用小鼠建立CLP脓毒症动物模型,1h后,取100μl PBS,腹腔注射小鼠体内;（3）CLP+LD-PDX组:行CLP术,1h后,将500ng PDX溶解于100μl PBS中,腹腔注射到小鼠体内;（4）CLP+HD-PDX组:行CLP术,1h后,将1000ng PDX溶解于100μl PBS中,腹腔注射到小鼠体内。24h后抽取动脉血行血气检测。收集肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）,收集结扎的小鼠右肺组织。我们采用HE染色的方法,在光镜下观察肺组织病理学改变,进行肺损伤评分,称重并计算肺组织湿干重比。使用BCA检测BALF中蛋白浓度,使用酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定BALF中炎症因子白介素1β（interleukin-1β,IL-1β）、白介素6（interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）、和巨噬细胞炎性蛋白2（macrophage inflammatory protein-2,MIP-2）的浓度。结果:CLP组与Sham组相比,氧合指数显著降低,肺组织可见明显病理损伤,且肺病理损伤评分、湿干重比及BALF中蛋白浓度明显增高,显著上调了IL-1β、IL-6、TNF-α、和MIP-2炎性因子的表达;PDX的使用明显提高了氧合指数,减轻了肺组织病理学改变,降低了肺损伤评分、湿干重比及BALF中的蛋白浓度,显著下调炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α、和MIP-2的表达;与CLP+LD-PDX组相比,CLP+HD-PDX组的氧合指数更高,肺组织病理损伤得到更为有效的改善,肺损伤评分、干湿重比及BALF蛋白浓度及炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α、和MIP-2的表达更低。结论:PDX能改善氧合指数,减轻肺组织病理损伤,降低肺损伤评分、湿干重比及BALF中蛋白浓度,下调IL-1β、IL-6、TNF-α、和MIP-2炎性因子的表达,从而实现对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用,且大剂量PDX比小剂量PDX效果更好。第二部分PDX通过调节中性粒细胞凋亡保护脓毒症致急性肺损伤目的:建立CLP致小鼠脓毒症肺损伤模型及脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）刺激体外中性粒细胞模型,观察PDX对中性粒细胞凋亡的调节作用。方法:动物模型:28只雄性6-8周C57小鼠随机分为4组,每组各7只小鼠:（1）假手术组（Sham）:小鼠假手术,用剪刀切开小鼠腹腔,缝合各层,1h后,取100μl PBS,腹腔注射小鼠体内;（2）脓毒症（CLP）组:用小鼠建立CLP脓毒症动物模型,1h后,取100μl PBS,腹腔注射小鼠体内;（3）CLP+LD-PDX组:行CLP术,1h后,将500ng PDX溶解于100μl PBS中,腹腔注射到小鼠体内;（4）CLP+HD-PDX组:行CLP术,1h后,将1000ng PDX溶解于100μl PBS中,腹腔注射到小鼠体内。24h后,收集BALF并进行白细胞分类计数,采用流式细胞术检测中性粒细胞凋亡情况。体外细胞实验:首先,采集健康成年志愿者的外周血,将中性粒细胞按照1×106/ml密度接种于培养板上,依据使用的PDX浓度不同将细胞分为4组:（1）对照组:用0.038%PB培养基培养;（2）PDX小剂量组:用PDX终浓度10n M培养基培养;（3）PDX中剂量组:用PDX终浓度100n M培养基培养;（4）PDX大剂量组:用PDX终浓度为1000n M培养基培养。不同的组别至少设置3个复孔。细胞经PDX处理24h后进行MTT实验检测PDX毒性。其次,将中性粒细胞按照1×106/ml密度接种于培养板上,根据药物不同将细胞分为5组:（1）对照组:用加入PDX溶剂即0.038%PBS的培养基培养中性粒细胞;（2）LPS组:用1μg/ml LPS的培养基处理;（3）LPS+PDX10n M组:1μg/ml LPS培养基处理1h,加入PDX使终浓度10n M;（4）LPS+PDX100n M组:1μg/ml LPS培养基处理1h,加入PDX使终浓度100nM;nLPS+PDX1000nM组:1μg/ml LPS培养基处理1h,加入PDX使终浓度1000n M。不同的组别至少设置3个复孔。中性粒细胞经24h培养后进行流式细胞术检测其凋亡情况,以2,7-二氯氢化荧光素二酯（2,7-Dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA）作为探针,检测细胞中活性氧（reactive oxygen species,ROS）表达水平,采用ELISA检测细胞炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MIP-2的水平。结果:在动物模型中,与Sham组相比,CLP组BALF中总细胞数、中性粒细胞及单核/巨噬细胞数明显增多,且应用流式细胞术检测发现中性粒细胞凋亡显著减少;与CLP组相比,PDX的使用明显减少了总细胞数及中性粒细胞数,且流式细胞术检测提示显著促进了中性粒细胞的凋亡;与CLP+LD-PDX组相比,CLP+HD-PDX组的总细胞数及中性粒细胞数减少更多,且流式结果显示中性粒细胞凋亡的更多。细胞试验中,不同剂量的PDX对中性粒细胞无毒性作用;LPS显著降低中性粒细胞凋亡;与LPS组比较,LPS+PDX100n M组和LPS+PDX1000n M组能显著促进中性粒细胞凋亡,而LPS+PDX10n M的这一作用不明显;与LPS+PDX10n M组相比,LPS+PDX100n M组和LPS+PDX1000n M组促进中性粒细胞凋亡的作用更显著;与LPS+PDX100n M组,PDX1000n M组能更有效地促进中性粒细胞凋亡。因此,我们后面的细胞实验中,不再加入LPS+PDX10n M组。与Control组相比,LPS组ROS产生显著增加,刺激中性粒细胞生成大量IL-1β、IL-6、TNF-α、MIP-2;LPS+PDX100n M组和LPS+PDX1000n M明显减少LPS诱导的ROS产生,显著降低细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF-α、MIP-2）的浓度;与LPS+PDX100n M组相比,LPS+PDX1000n M组产生的ROS明显减少,L-1β、IL-6、TNF-α的水平明显降低。结论:PDX通过促进中性粒细胞凋亡发挥对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用。第三部分PDX通过PI3K-AKT及MAPK-ERK信号通路调节中性粒细胞凋亡目的:探讨PDX调节中性粒细胞凋亡的可能分?机制。方法:采集健康成年志愿者的外周血,将中性粒细胞按照1×106/ml密度接种于培养板上,根据药物不同将细胞分为4组:（1）对照组:用加入PDX溶剂即0.038%PBS的培养基培养;（2）LPS组:1μg/ml LPS培养基处理;（3）LPS+PDX100n M组:1μg/ml LPS培养基处理1h,加入PDX使终浓度100n M;（4）LPS+PDX1000n M组:1μg/ml LPS培养基处理1h,加入PDX使终浓度1000n M。不同的组别至少设置3个复孔。24h后分离出细胞,western blot检测p-AKT、p-ERK、p-p38、Bcl-2、Bax的表达。结果:LPS明显上调了中性粒细胞中p-AKT、p-ERK、p-p38、Bcl-2的表达,下调了Bax的表达;与LPS组相比,PDX100n M组和PDX1000n M显著降低了p-AKT、pERK、p-p38、Bcl-2的表达,显著上调了Bax的表达;与LPS+PDX100n M组相比,1000n MPDX明显降低中性粒细胞中p-ERK、p-p38的表达,上调了Bax的表达。结论:PDX促进脓毒症模型中性粒细胞凋亡作用是通过下调Bcl-2的表达,上调Bax的表达来实现的,其机制可能是PI3K/AKT及P38/ERK信号通路介导的。