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研究背景与目的膀胱癌（Bladder cancer）是最常见的泌尿系肿瘤之一,发病率和死亡率在我国逐年上升,而且膀胱癌较高的复发率导致其预后较差。近年来,研究发现长链非编码RNA（LncRNA）在恶性肿瘤的发生进展过程,以及后期的预后和耐药性起到重要作用。其中,越来越多的学者开始研究LINP1与肿瘤之间的关系,研究发现LINP1在不同的肿瘤中发挥重要的作用。但是,LINP在膀胱癌中的作用尚无人研究。因此本课题希望探索LINP1在膀胱癌中的表达情况,及其对膀胱癌生长侵袭进展影响,初步探讨LINP1调控膀胱癌的相关通路,研究膀胱癌的发病机制,对膀胱癌的诊断和治疗方法提供新的思路。研究方法1.利用GEPIA数据库分析LINP1在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的表达;2.纳入2018年8月至2020年5月于广州医科大学附属第三医院泌尿外科收集的10例膀胱癌患者新鲜膀胱癌组织及癌旁正常膀胱组织,应用qPCR技术检测LINP1的表达情况;3.构建LINP1过表达质粒,瞬时转染膀胱癌细胞株5637及BIU87,应用qPCR技术检测LINP1表达量,检测过表达效果;4.构建干扰片段SiRNA-LINP1,转染膀胱癌细胞株5637及BIU87,用qPCR检测LINP1表达量,检测干扰效果;5.瞬时转染LINP1过表达质粒和干扰片段SiRNA-LINP1至膀胱癌细胞株:（1）CCK-8试剂盒检测细胞生长曲线的变化;（2）Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的改变;6.通过高通量转录组测序对比稳转LINP1-5637和稳转NC-5637的miRNA、LncRNA和mRNA的表达,预测ceRNA网络和与LINP1可能相互作用的相关信号通路蛋白;7.通过双荧光素酶验证LINP1与hsa-mir-148a-3p的结合;8.通过WB法检测过表达LINP1和干扰SiRNA-LINP1对膀胱癌细胞株中对Wnt/β-catenin信号通路蛋白和EMT通路蛋白表达的影响;9.统计学分析:两组间差异采用t检验,三组及以上组间差异采用方差分析。研究结果1.GEPIA数据库显示LINP1在膀胱癌组织中表达上调;qPCR检测发现10对膀胱癌组织与癌旁正常组织中,LINP1在膀胱癌组织中的较癌旁正常组织高表达;2.瞬时转染LINP1过表达质粒至膀胱癌5637和BIU87细胞株,5637可以有效上调LINP1表达水平,BIU87则表达下调;3.干扰片段SiRNA-LINP1转染膀胱癌细胞株5637及BIU87,5637和BIU87均下调LINP1表达;4.细胞功能实验表明下调LINP1的表达可抑制膀胱癌细胞增殖、迁移侵袭,而过表达LINP1可以增强膀胱癌细胞增殖和迁移侵袭。5.miRNA和mRNA测序结果:过表达LINP1后,买Wnt通路的miRNA明显增加,其中hsa-mir-148a-3p明显上调并靶向Wnt1蛋白。6.双荧光素酶试验:LINP1是靶向结合hsa-mir-148a-3p。7.WB结果表明上调LINP1明显增加Wnt/β-catenin信号通路中的Wnt1蛋白和β-catenin蛋白的表达;同时增加了而EMT通路蛋白中N-cadherin和Vimentin的表达。下调LINP1后减少了 Wnt/β-catenin信号通路中的Wnt1蛋白和β-catenin蛋白的表达,同时也减少了 EMT通路蛋白中N-cadherin和Vimentin的表达。膀胱癌细胞株过表达LINP1后加入mir-148a-3p,会抑制Wnt1与β-catenin 蛋白表达;干扰 LINP1 后再抑制 mir-148a-3p,出现 Wnt1 与β-catenin蛋白表达增多。研究结论1.LINP1在膀胱癌组织的表达高于癌旁正常组织;2.LINP1在膀胱癌中促进膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;3.LINP1表达水平与Wnt1的表达水平有间接关系,主要呈正相关;4.LINP1作为mir-148a-3p的竞争性内源性RNA（ceRNA）,间接调控Wnt/β-catenin信号通路中Wnt1蛋白表达,进而调控EMT通路改变膀胱癌细胞迁移侵袭能力。