家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂20的表达特征分析

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家蚕(Bombyx mori, B. mori)属鳞翅目昆虫,是较早完成全基因组测序的模式生物,并且是被驯化与改良的重要农业经济昆虫。丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine proteinase inhibitor)是一类丝氨酸蛋白酶活性调节剂,参与细胞迁移、血液凝固、炎症反应、细胞分化和凋亡、免疫、纤维蛋白溶解、及组织重建等重要过程。  本研究利用 pET-28a(+)表达载体在大肠杆菌 Transetta(DE3)中融合表达 Bombyx mori serine protease inhibitor-20(BmSerpin-20)蛋白,利用纯化的重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,利用实时定量PCR技术及Western Blot方法分别分析BmSerpin-20基因和蛋白的组织表达水平、病原物免疫刺激后的表达模式以及抗菌肽基因的表达模式。  在大肠杆菌中正确表达和纯化了融合BmSerpin-20蛋白,并制备了多克隆抗体。BmSerpin-20基因和蛋白在脂肪体、中肠、血细胞、马氏管、表皮、睾丸、卵巢中均有表达,且在表皮中表达量最高。家蚕五龄幼虫经核型多角体病毒( Nuclear polyhedrosis viruses)、藤黄微球菌(Micrococcus luteus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、白僵菌(Beauveria bassiana)处理后,BmSerpin-20基因表达量先下调而后上调,但不同病原物在不同时间的影响不尽相同。BmSerpin-20蛋白处理家蚕后,天蚕素抗菌肽(Cecropin D),葛佬素抗菌肽(Gloverin2)和Moricin基因表达量明显降低。  本研究获得了BmSerpin-20蛋白和抗体,并研究了BmSerpin-20基因在组织及病原物免疫刺激后表达模式,以及抗菌肽基因的表达模式,为下一步研究其在家蚕免疫系统中的作用奠定了基础。
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