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中药的内在品质直接关系到临床的疗效和安全,常规的以单一或某几个成分来控制中药的质量明显达不到控制中药品质的目的。2000年,国家颁布的《中药注射剂指纹图谱研究技术要求(暂行)》的通知后,指纹图谱已成为当前中药质量研究和控制的一个热点。然而,我们也应清醒的认识到:目前的指纹图谱仅仅局限在“化学成分群”的分析,所得图谱并不能如实体现中药的内在品质和疗效。如何将指纹图谱中的“化学成分群”与中药的药效相对应,即“谱-效”的高度对应或关联,这正是本论文所要研究和解决的问题。本论文以芸香科植物两面针Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.为研究对象,以7901、7404两种肿瘤细胞为药效模型,构建两面针的HPLC指纹图谱。在抗肿瘤活性筛选的结果和化学成分指纹图谱的建立基础上,采用后退法,寻找两面针“谱-效”之间的对应关系。本论文的研究包括:方法:(1)两面针抗肿瘤活性部位的筛选及测定采用回流法,分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水等4种溶剂对两面针药材进行提取,得到不同溶剂部位提取物;采用MTT法,以人胃腺癌细胞7901和人肝癌细胞BEL-7404为模型,对不同溶剂部位提取物进行活性成分筛选,确定两面针药材中抗肿瘤的活性部位。对43个产地的两面针药材样品进行抗肿瘤活性的测定,得到各样品对7901和7404肿瘤细胞的抑制率。(2)建立两面针HPLC化学指纹图谱根据化学指纹图谱研究的要求,运用国家药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件,建立并评价两面针抗肿瘤活性部位的HPLC指纹图谱。(3)构建两面针谱-效关系模型将两面针药材HPLC指纹图谱中峰面积进行量化,与MTT法测得两面针药材抗肿瘤活性的结果结合,采用后退法构建两面针抗肿瘤“谱-效”关系。(4)用HPLC法对样品中左旋芝麻素、氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱的含量进行测定,并结合这三种化学物质标品的浓度对7901和7404细胞的增殖抑制作用之间的关系,推测样品中这三种化学物质的药效,说明两面针药材中各成分之间的相互作用。(5)用聚类分析的方法,分别对5个产地的两面针的根、茎及其伪品进行鉴别。结果:(1)氯仿提取部位为两面针药材抗肿瘤的活性部位,该部位含有氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱等生物碱类成分。样品的抗肿瘤活性由高到低排列为:广西那坡县>广西融水县>广西大塘镇>广西武鸣县>玉林药材市场。(2)建立的两面针药材HPLC指纹图谱,其中的24个指纹峰包括已知具有抗肿瘤活性的氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱等成分。所建立的HPLC指纹图谱也能很好的区分两面针与其非药用部位、伪品等,这有利于进一步规范两面针药材的质量标准。(3)后退法表明:HPLC指纹图谱中的24个指纹峰中,有16个峰对7404肿瘤细胞有作用,7404的谱-效关系式为:Y=61.694+9.154X1 -12.423X2-4.137X4+9.241X6-14.578X7-2.129X10-9.759X12-4.819X13-11.475X15+5.356X16+4.041X18-6.399X19+4.209X20+16.245X22-1.757X23+9.155X24(R2=0.923);有14个峰对7901肿瘤细胞有作用,7901的谱-效关系式为:Y=79.153-8.503X1+6.79X5+4.529X6-5.108X7+5.231X10-8.32X11-9.404X12 -23.646X15+9.853X16+5.008X17-6.819X20+3.987X21+3.935X22-3.006X23(R2=0.913)。10批药材的验证表明所得的谱-效关系式计算值与实际值十分接近。(4)两面针单一成分的药效小于总药效;左旋芝麻素、氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱的药效之和大于总药效。(5)两面针的根,茎以及伪品,用聚类分析的方法能明显区分开来。结论:(1)由于两面针药材含有复杂的化学成分,直接影响到了其药效的差异。因此,不能用单一或某几个化学成分对两面针药材的质量进行控制。(2)通过对药效部位的HPLC指纹图谱分析,不仅较好的体现出两面针中左旋芝麻素、氯化两面针碱、乙氧基白屈菜红碱等活性成分,也可以进行药材真伪的鉴别,达到了对两面针药材品质和疗效控制的目的。(3)本研究所建立的谱-效关系式很好的反映出两面针药材的内在品质,能指导临床的用药安全和有效性。(4)两面针所含的各化学成分之间,具有相互协同和抑制作用,所反映出来的药效是各成分综合作用的结果。(5)两面针的根,茎以及伪品,由于化学成分的不同,用聚类分析的方法容易鉴别出来,因此三者之间不能混用。