【摘 要】
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研究背景胆囊癌是发病率较低但恶性程度极高的肿瘤,其发病率在消化道肿瘤中排第六位。目前根治性手术切除是唯一可能治愈胆囊癌的方法,但由于其早期缺乏特异性症状,大部分患者一经发现已至进展期,根治性切除率低,故预后极差,五年生存率不足5%。miRNA是一类小分子非编码RNA。它可以通过与靶基因的3’UTR区结合来参与对下游分子与信号通路的调控作用。miRNA在许多恶性肿瘤的发生发展过程中都扮演了至关重要的
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研究背景胆囊癌是发病率较低但恶性程度极高的肿瘤,其发病率在消化道肿瘤中排第六位。目前根治性手术切除是唯一可能治愈胆囊癌的方法,但由于其早期缺乏特异性症状,大部分患者一经发现已至进展期,根治性切除率低,故预后极差,五年生存率不足5%。miRNA是一类小分子非编码RNA。它可以通过与靶基因的3’UTR区结合来参与对下游分子与信号通路的调控作用。miRNA在许多恶性肿瘤的发生发展过程中都扮演了至关重要的角色。方法1、通过前期的高通量miRNA芯片检测了胆囊癌组织以及其相应的癌旁正常组织中miRNA的表达情况,同时结合TCGA数据库的资料,筛选出miR-99a-5p作为研究对象。2、采取实时荧光定量PCR的方法检测了胆囊癌患者癌组织及其相应的癌旁组织中miR-99a-5p的表达情况,并分析miR-99a-5p与胆囊癌患者的临床病理资料以及预后的相关性。3、通过细胞功能学实验和体内动物实验研究miR-99a-5p对胆囊癌细胞的增殖和侵袭转移能力是否存在调控作用。4、通过生物信息学方法预测miR-99a-5p的靶基因,使用双荧光素酶报告基因试验检测miR-99a-5p是否与靶基因的3’UTR区产生作用,并用Western blot实验检测miR-99a-5p是否能在蛋白水平抑制靶基因的表达,同时判断miR-99a-5p是否对相关信号通路和EMT相关指标产生影响。5、用细胞功能学实验验证miR-99a-5p的候选靶基因SMARCA5在胆囊癌中的相关功能,并用回复实验验证miR-99 a-5p能够通过靶定SMARCA5实现抑制胆囊癌细胞侵袭和转移的功能。结果1、通过miRNA芯片分析结合实时荧光定量PCR验证,发现miR-99a-5p在胆囊癌患者癌组织中普遍低表达,且miR-99a-5p的低表达与胆囊癌患者的不良预后具有显著相关性;2、体内体外实验证明miR-99a-5p的过表达通过调控PI3K/AKT通路和EMT作用抑制了胆囊癌细胞的侵袭和转移功能;3、MTOR和SMARCA5确为miR-99a-5p的直接下游靶基因;4、SMARCA5能够促进胆囊癌细胞的侵袭和转移,且直接介导了miR-99a-5p抑制胆囊癌侵袭转移功能的作用。结论miR-99a-5p在胆囊癌患者癌组织中普遍低表达,通过靶基因MTOR、SMARCA5以及PI3K/AKT通路和EMT作用抑制了胆囊癌的侵袭转移功能,miR-99a-5p可能成为胆囊癌综合治疗的潜在靶点。
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