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目的:通过观察经博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织和肺泡巨噬细胞(Alveolar macrophage,AM)中IL-17A的表达,探讨IL-17A在肺纤维化发病机制中的作用和意义。方法:1.取20只Wistar雌性大鼠(体重为180~200g)随机分为生理盐水对照组(NS组)和博莱霉素致肺纤维化模型实验组(BLM组),每组10只;2.BLM组:气管内一次性注入经生理盐水稀释的博莱霉素溶液0.2ml(5mg/kg体重,BLM溶液浓度为5mg/ml),用以诱导大鼠复制肺纤维化模型;NS组:气管内一次性注入0.2ml生理盐水(1ml/kg体重);3.然后各组分别于气管内灌注后第7天和第28天各随机处死大鼠5只,无菌操作下行支气管肺泡灌洗,回收支气管肺泡灌洗液(Bronchial Alveolar Lavage Fluid,BALF),取出肺组织,病理学方法观察各阶段肺内炎症和纤维化程度,免疫组化检测肺组织IL-17A表达。收集BALF分为两组,一组用作细胞总、分数测定,以及用酶联免疫吸附实验法(ELISA法)测定BALF中TNF-、IL-17A的含量;一组用作AM的分离与纯化、培养,培养上清液用ELISA法测定IL-17A的含量,提取AM总RNA后用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase ChainReaction,RT-PCR)测定肺泡巨噬细胞IL-17A的mRNA表达。结果:1.肺组织病理切片观察:NS组第7天及第28天均无肺泡炎及肺纤维化表现,肺组织结构正常;BLM组第7天时主要表现为肺泡炎,BLM组第28天时主要表现为肺纤维化,但肺泡炎仍存在;2.BALF细胞总、分数的测定结果分析:NS组BALF细胞总数无明显变化,而BLM组BALF细胞总数第7天明显增高,与NS组比较,差异有统计学意义(P<0.05),第28天BALF细胞总数恢复至正常水平,与NS组比较,差异无统计学意义(P>0.05);3.肺泡炎和肺纤维化分级计分的定量分析:NS组各时间点均未表现肺泡炎及肺纤维化。BLM组肺泡炎程度在第7天表现显著,与NS组比较,差异有统计学意义(P<0.05),第28天时肺泡炎仍存在,但程度明显减轻,与NS组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。BLM组肺纤维化程度在第7天表现中度,在第28天表现显著,与NS组比较肺纤维化均加重,差异有统计学意义(P<0.05)。4.免疫组化肺组织IL-17A蛋白的分析:NS组大鼠肺组织中IL-17A表达弱,第7天及第28天均无明显变化,而BLM组第7天及第28天IL-17A表达较NS组比较明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05),第28天表达较第7天有所降低。5.ELISA检测BALF中TNF-、IL-17A显示NS组大鼠BALF中的TNF-、IL-17A含量无明显变化,而BLM组第7天及第28天TNF-、IL-17A含量明显增高,与NS组比较,差异有显著统计学意义(P<0.01),但第28天时TNF-、IL-17A含量较第7天降低。6.ELISA检测AM培养上清液中IL-17A显示NS组7天、28天AM各时期培养中呈弱表达,各时期之间相比较,差异无统计学意义(P>0.05);BLM组7天、28天AM培养第12小时、第24小时、第48小时上清液中IL-17A的表达与NS组比较均明显增高,差异显著有统计学意义(P<0.01)。7.RT-PCR检测显示IL-17A在NS组AM各时期培养中有微弱表达,各时期之间相比较,差异无统计学意义(P>0.05);BLM组7天、28天各时期的表达明显高于NS组,差异有统计学意义(P<0.05),尤以第12h显著,24h、48h表达逐渐减弱。8.相关分析:BALF中细胞总数、BALF中TNF-含量、BALF中IL-17A含量、肺组织IL-17A蛋白的表达与肺泡炎程度积分呈正相关。 BALF中TNF-含量、BALF中IL-17A含量、肺组织IL-17A蛋白的表达三者之间呈正相关。第7天时BALF中TNF-含量、BALF中IL-17A含量、肺组织IL-17A蛋白的表达分别与BALF中性粒细胞数呈正相关;而第28天时它们之间的相关性较差。结论:1.本实验通过博莱霉素诱导成功建立了大鼠肺纤维化模型。2.肺纤维化的发展中,肺泡巨噬细胞和肺组织中IL-17A表达及分泌均升高,在肺泡炎阶段尤为明显。3. IL-17A可能促进了肺泡炎的发展,并且在肺纤维化的发生、发展病理过程中可能参与了作用。