氧化石墨烯/壳聚糖3D复合支架材料的生物相容性研究

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壳聚糖(Chitosan,CS)是自然界广泛存在的多糖,具有优良的生物相容性、成膜性、抗菌性和降解性。壳聚糖作为组织工程支架材料具有得天独厚的优势,已在皮肤组织工程、骨组织工程、牙周组织工程、神经组织工程、软骨组织工程、心肌组织工程、眼角膜组织工程等方面有极为广泛的应用。作为组织工程支架材料,壳聚糖存在力学强度不足、降解速率与组织生成速率不匹配等缺陷。氧化石墨烯(Graphene oxide,GO)是石墨烯(Graphene)的衍生物,由单层碳原子以sp2杂化形成二维蜂窝状晶格结构,与石墨烯的结构类似,只是在一层二维空间基面上连接大量的含氧基团,有较大的比表面积和丰富的官能团,亲水性良好,为GO进一步功能化提供充足的活性位点,是一种性能优异的新型碳材料。GO在载药、基因传递、生物成像以及组织工程中均有广泛的应用前景。本文采用低温热还原法将氧化石墨烯涂覆在壳聚糖支架上制成固体复合支架材料,来研究GO/CS复合支架材料的生物相容性。本课题将L929成纤维细胞、神经元细胞接种在CS、0.02-GO/CS和1.0-GO/CS复合支架材料上(CS为对照组),48 h后用CCK-8试剂盒于450 nm波长处测定OD值,分析细胞增殖活性;通过免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜和扫描电镜,观察细胞形态、黏附与增殖情况;通过石蜡切片检测细胞黏附位置;然后将CS、0.02-GO/CS和1.0-GO/CS复合支架材料移植到小鼠背部皮下组织,进行体内生物相容性检测;最后将复合材料植入到小鼠背部皮肤创面,研究该复合支架材料是否有作为组织工程皮肤支架材料的潜质。结果表明:⑴细胞沿着材料边缘生长、黏附并增殖,在0.02-GO/CS上生长的细胞活性最高、状态最好,形态呈梭形,而相比于CS和0.02-GO/CS两种支架材料,1.0-GO/CS抑制了细胞的活性。⑵材料移植体内后几乎看不到炎性细胞,且30天后在体内能够降解,CS和0.02-GO/CS两种材料几乎看不到,只能看到小面积的1.0-GO/CS复合支架材料。⑶创面移植结果表明,不同GO含量的GO/CS复合支架材料,均能够与皮肤组织结合生长,没有明显的炎性反应,且CS和0.02-GO/CS复合支架材料周围的皮肤组织开始愈合,而1.0-GO/CS复合支架材料周围组织没有明显变化。以上结果表明,0.02-GO/CS复合支架材料具有良好的生物相容性和降解性,具有作为组织工程皮肤支架材料的潜质。
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