目的:探讨通过实时荧光定量PCR方法检测Rh阴性孕男胎孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性产前诊断胎儿RhD基因型的方法。　　 方法:通过提取母血浆中胎儿游离DNA,利用实时荧光定量聚合酶链反应技术(Real time PCR)检测其血浆中男性性别决定基因SRY基因,确定胎儿DNA的存在。检测妊娠15～40周的单胎RhD阴性孕妇血浆中胎儿游离DNA进行SRY基因和RhD基因外显子7、10和内含子4的特异性扩增,结果与产后新生儿脐血血清学RhD定型检测结果进行对比分析,评价该技术方法检测胎儿RhD基因分型结果的准确性。　　 结果:孕妇血浆中存在游离胎儿DNA。在22例样本中,通过血型确认试验19例为真正RhD阴性孕妇,3例为RhDel。在19例RhD阴性孕妇血浆中,14例均检测到胎儿游离DNA的RhD基因外显子7、10和内含子4的特异性扩增,判断为RhD阳性,其基因定型结果与新生儿脐血血清学表型相符。3例未检测到胎儿游离DNA的RhD基因外显子7、10和内含子4的特异性扩增,其基因定型结果与新生儿血清学表型均相符。另外2例检测到RhD基因外显子7、10和内含子4的特异性扩增,通过新生儿脐血血清学吸收放散试验确定为RhDel型。因此检测胎儿游离DNA的RhD基因型准确率达到89.5％(17/19)。3例RhDel型孕妇血浆中检测到RhD基因扩增,不适于进行胎儿RhD的分型。　　 结论:实时荧光定量PCR方法能简单、快速、方便的检测孕妇血浆胎儿游离DNA,其敏感度高、特异性好,且可以定量分析,为无创性产前诊断提供了很好的技术方法,具有较高的临床应用价值。利用Rh阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性诊断胎儿RhD基因型,是一种简便、快速且无损伤性的产前基因诊断的可行性方法,可用于新生儿溶血病的预防和诊断,值得临床推广应用。