论文部分内容阅读
为研究丙氨酰谷氨酰胺二肽(Alanylglutamine dipeptide, Ala-Gl)和甘氨酰谷氨酰胺二肽(Glyc ylglutamine dipepti de, Gly-Gln)在断奶仔猪肠道中的降解、吸收特点和两种二肽对断奶仔猪肠道发育的影响,本研究进行了以下三个试验：试验一：谷氨酰胺二肽在断奶仔猪离体空肠的水解本试验旨在研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在断奶仔猪空肠中的水解特点。试验采用体外培养断奶仔猪外翻肠段的方法,将培养液分三个处理(空白对照组、Ala-Gln二肽组和Gly-Gln二肽组),每个处理三个重复,每个重复一个肠段,37℃恒温孵育60min,每5 min取样一次,通过检测培养液中完整二肽的含量来研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在空肠中的水解情况。结果如下：在孵育60 min后,培养液中Ala-Gln二肽含量为9.00±1.57 mmol/L, Gly-Gln二肽含量为8.85±1.78 mmol/L,两种二肽浓度差异不显著(P>0.05)；孵育60 min后,Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽的降解速率分别是0.17±0.03 mmol/L/miin、0.19±0.03 mmol/L/min,两者之间差异不显著(P>0.05)。结果表明：60 min内Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在断奶仔猪肠段培养液中的含量均随着时间的延长逐渐降低,但并未完全降解,本试验为进一步研究这两种小肽的完整吸收提供了依据。试验二：谷氨酰胺二肽在断奶仔猪离体空肠中的吸收特点本试验旨在研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在断奶仔猪空肠中的吸收特点。试验采用外翻肠囊的方法,将培养液分五个处理,即空白对照组、Ala-Gln二肽组、游离Ala+Gln组、Gly-Gln二肽组和游离Gly+Gln组,每个处理三个重复,每个重复一个外翻肠囊,37℃恒温孵育40 min后取样,通过检测培养液、浆膜液和组织匀浆液中完整二肽和单体谷氨酰胺的含量,来研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在小肠中的吸收情况。结果如下：Ala-Gln的吸收量和吸收速率分别是10.26±0.74 mmol/L、0.26±0.02 mmol/L/min,显著高于Gly-Gln吸收量和吸收速率(分别是7.25±1.47 mmol/L、0.18±0.04 mmol/L/min) (P＜0.05); Gly-Gln二肽吸收量(速率)高于Gly+Gln处理的中Gln吸收量(速率),Ala-Gln二肽吸收量(速率)显著高于Ala+Gln处理中Gln吸收量(速率)(P<0.05)；游离Ala+Gln处理中Gln吸收量和转运速率分别是7.28±0.54 mmol/L和0.18±0.01 mmol/L/min,均高于Gly+Gln处理中Gln吸收量和吸收速率(P<0.05),分别是4.79±0.54 mmol/L和0.12±0.01 mmol/L/min.以上结果表明,Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽均能以完整形式被迅速吸收；Ala-Gln二肽吸收速率高于Gly-Gln二肽吸收速率,高于游离谷氨酰胺吸收速率。试验三：谷氨酰胺二肽对断奶仔猪空肠发育的影响本试验旨在研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽对断奶仔猪空肠发育的影响。采用体外培养肠组织的方法,将培养液分为三个试验组：空白对照组、Ala-Gln组和Gly-Gln二肽组；两个二肽组分别包括2mmol/L、4mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、30. mmol/L相应二肽处理,将组织置于二氧化碳培养箱中,95%O2 37℃恒温培养48 h～96 h,通过检测培养液中乳酸脱氢酶的活性、肠组织蛋白含量、谷氨酰胺酶和二胺氧化酶活力、BrdU掺入细胞核的情况、Caspase-3表达情况,来研究Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽对肠组织中谷氨酰胺代谢、细胞增殖和凋亡的影响。结果显示：与空白对照组相比,添加Ala-Gln二肽或Gly-Gln二肽后能降低培养液中乳酸脱氢酶活力；能显著提高断奶仔猪空肠组织蛋白含量(P<0.05)、谷氨酰胺酶活力(P<0.05)和二胺氧化酶活力(P<0.05),且随着二肽浓度提高而逐渐增加,当Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽浓度分别为20 mmol/L、30 mmol/L时,空肠组织蛋白含量和二胺氧化酶活力最高,当两种二肽浓度均为20mmol/L时,空肠组织谷氨酰胺酶活力最高；Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽都能显著提高BrdU掺入细胞核的阳性细胞百分比(P<0.01)、增加BrdU免疫阳性细胞的平均光密度(P<0.01),均随着二肽浓度提高而逐渐增加,当两种二肽浓度均为30 mmol/L时效果最佳；Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽都能显著降低肠组织Caspase-3免疫阳性细胞百分比(P<0.01)和Caspase-3免疫阳性细胞平均光密度(P<0.01),随着二肽浓度增加而逐渐降低；两种二肽浓度在20 mmol/L与30 mmol/L时,作用效果差异不显著(P>0.05)。结果表明,Ala-Gln二肽、Gly-Gln二肽通过提高肠组织谷氨酰胺代谢酶活力而加强组织对Gln利用,从而促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、提高空肠组织蛋白含量。谷氨酰胺二肽作用效果随其浓度提高而呈剂量依赖效应,且相同浓度的两种二肽作用效果基本一致。当两种二肽浓度均为20 mmol/L时,空肠组织谷氨酰胺酶活力最高；当Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽浓度分别是20 mmol/L、30 mmol/L时,空肠组织蛋白含量和二胺氧化酶活力最高；当两种二肽浓度为30mmol/L时,其促进空肠细胞增殖,抑制细胞凋亡效果最佳。综上所述,Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽在断奶仔猪空肠培养液中培养60 min后并不完全被降解,其降解速率分别是0.17±0.03mmol/L/min. 0.19±0.03 mmol/L/min。40 min内,Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽能以完整形式被吸收,吸收量分别是10.26±0.74 mmol/L和7.25±1.47 mmol/L; Ala-Gln二肽吸收速率高于Gly-Gln二肽,高于游离谷氨酰胺吸收速率。Ala-Gln二肽和Gly-Gln二肽通过提高空肠组织谷氨酰胺酶活力和二胺氧化酶活力,加强细胞对谷氨酰胺的利用强度,从而促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、提高组织蛋白含量,最终起到保护细胞完整性的作用。两种肽作用效果均随二肽浓度提高而呈剂量依赖效应,且相同浓度的两种二肽作用效果基本一致。