软骨源性形态发生蛋白-2诱导骨髓间充质干细胞表达软骨细胞表型的实验研究

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目的研究软骨源性形态发生蛋白-2(CDMP-2)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨分化的作用。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),贴壁细胞传代,取第3代细胞,对照组(A组)以L-DMEM无血清培养液培养,实验组(B、C、D组)以L-DMEM无血清培养液培养,分别加入CDMP-2(100 ng/ml)、TGF-β1(10 ng/ml)和CDMP-2(100ng/ml)+TGF-β1(10 ng/ml),倒置相差显微镜观察细胞形态,14天后终止培养,行甲苯胺蓝染色,免疫组织化学染色和Western blot检测软骨特异性Ⅱ型胶原的表达。结果诱导14天后可见BMSCs形态由梭形向软骨细胞的多边形转变。甲苯胺蓝染色示糖胺聚糖(GAGs)均匀分布于基质中,免疫组织化学染色和Western blot示实验组Ⅱ型胶原表达阳性,且CDMP-2+TGF-β1组细胞表达Ⅱ型胶原水平高于单独给予CDMP-2、TGF-β1组(P<0.05);对照组未见阳性表达。结论CDMP-2能够在体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨方向分化;与TGF-β1相比,CDMP-2诱导能力更强;CDMP-2与TGF-β1在诱导BMSCs向软骨分化时具有协同作用,两者合用成软骨的效应最大。
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