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研究背景随着百草枯农药的禁用,敌草快农药在除草剂市场销售量剧增,其更加广泛地应用到我国农业生产中,随之而来的急性敌草快中毒事件发生率也逐年上升。然而,敌草快致毒机制尚未完全明确,且未有特效解毒剂的研发。因此敌草快中毒的救治已成急诊领域和公共卫生领域所面临的又一个挑战和难题。研究目的本研究设计并开展对敌草快染毒大鼠急性毒性实验,初步探究糖皮质激素是否对于敌草快致急性肾损伤具有治疗作用。对实验结果进行分析、讨论和总结,以期为敌草快中毒发病机制及治疗相关研究提供有力实验依据。研究方法本研究将150只Wistar大鼠,随机分为6组:DQ组,GC组,Ctrl组,DQ+L-GC组,DQ+M-GC组,DQ+H-GC组,每组25只。每组又根据饲养的时间和治疗的疗程不同分为染毒后24h,3d,7d,14d,21d五个亚组,每个亚组5只。分别将DQ组、DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组大鼠给予115.5mg/kg敌草快加注射用水稀释至1ml一次性灌胃。Ctrl组和GC组大鼠给予1ml注射用水一次性灌胃。灌胃后30min,给予DQ+L-GC组的大鼠地塞米松2.1mg/kg稀释至1ml腹腔注射,给予DQ+M-GC组的大鼠4.2mg/kg地塞米松稀释至1ml腹腔注射,给予DQ+H-GC组和GC组的大鼠8.4mg/kg地塞米松稀释至1ml腹腔注射。给予Ctrl组、DQ组的大鼠腹腔注射1ml注射用水,后每天给予每组大鼠同前的地塞米松或注射用水腹腔注射。7d后,将腹腔注射地塞米松统一改为6.3mg/kg泼尼松灌胃,再用7d后改为3.15mg/kg泼尼松灌胃,直至21d实验结束。实验开始后每天固定时间观察各组大鼠情况变化,同时监测大鼠体重变化,记录大鼠死亡情况。染毒后24h、3d、7d、14d、21d以100mg/kg戊巴比妥钠过量麻醉处死法腹腔注射处死大鼠,下腔静脉穿刺取血,离心后仪器测Cr、BUN,Elisa检测TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB。取左肾上段用于肾组织病理学检查。左肾下段用Elisa检测NGAL、KIM-1。右肾用 Western Blot 检测 TLR4、Myd88、IκBα、NF-κB p65。研究结果（1）一般状况:DQ组、DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组大鼠染毒后大部分出现如精神萎靡、烦躁、竖毛、易激惹等症状,少部分出现乏力、行走不稳及进食减少等。1-3d后逐渐出现呼吸急促、发绀、少尿甚至无尿等。7d左右大鼠鼻腔及眼部有较多的血性分泌物。绝大部分大鼠还出现腹泻,14d后毛色逐渐变黄,程度随时间逐渐加重。Ctrl组、GC组实验后精神状态良好,活动灵敏,动作迅速,进食进水正常,并未出现中毒症状及相关体征。（2）体重监测结果:Ctrl组、GC组大鼠在试验期间体重缓慢增加（P＞0.05）。与Ctrl组相比较,DQ组、DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组大鼠自染毒后,大鼠体重持续下降（P＜0.05）。7d左右体重下降至最低点,7d至21d体重逐渐上升。与DQ组相比较,前7dDQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组大鼠体重差异无统计学意义（P＞0.05）。7d 至 21d,DQ+L-GC 组、DQ+M-GC 组、DQ+H-GC 组大鼠体重增加（P＜0.05）。（3）肾组织病理学变化:Ctrl组未见明显异常,GC组7d后可见髓质的少量毛细血管淤血扩张并且逐渐加重。DQ组表现为肾小管萎缩,上皮细胞水肿,随着时间的推移,可见肾小管扩张并且变得形状不规则;肾皮质和髓质也有大量的毛细血管淤血扩张。DQ+L-GC组可见肾损伤均较DQ组减轻。DQ+H-GC组7d前未见明显损伤,但DQ+H-GC组7d-14d可见较多的肾小管扩张,形状不规则,上皮细胞溶解坏死。（4）肾组织损害指标:BUN含量:24hDQ+M-GC组、DQ+H-GC组和3dDQ+L-GC组、DQ+M-GC组的血清BUN含量与Ctrl组无统计学差异,其余时间点的DQ组、DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组血清BUN升高（P＜0.05）。与DQ组相比较,除14dDQ+M-GC组、DQ+H-GC组外,其余时间节点DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组血清中BUN含量不同程度的降低（P＜0.05）。血清Cr含量:与Ctrl组对比,各时间节点DQ组、DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组血清Cr升高（P＜0.05）。与 DQ 组相比较,24hDQ+L-GC 组;3dDQ+L-GC 组、DQ+M-GC 组、DQ+H-GC组;7dDQ+M-GC组;14dDQ+M-GC组、DQ+H-GC组的血清Cr较DQ组无明显变化（P＞0.05）。其余时间节点的糖皮质激素治疗组血清Cr含量有不同程度的下降（P＜0.05）。NGAL含量:与Ctrl组对比,各时间节点DQ组,DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组肾组织中NGAL含量升高（P＜0.05）。与DQ组相比较,各时间节点DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组肾组织中NGAL含量较DQ组下降（P＜0.05）。KIM-1含量:与Ctrl组对比,各时间节点DQ组、DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组肾组织中KIM-1含量升高（P＜0.05）。与DQ组相比较,各时间节点DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组肾组织中KIM-1含量较DQ组下降（P＜0.05）。（5）炎性因子活化NF-κB通路相关蛋白表达:TNF-α含量:与Ctrl组相比较,各时间节点的DQ组、DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组肾组织中TNF-α含量升高（P＜0.05）。与DQ组相比较,各时间节点DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组肾组织中TNF-α含量较DQ组降低（P＜0.05）。TLR4含量:与Ctrl组对比,各时间节点DQ组、DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组TLR4表达均增加（P＜0.05）。与DQ组对比,糖皮质激素治疗组肾组织TLR4表达均下降（P＜0.05）。MyD88含量:与Ctrl组相比较,各时间节点DQ组、DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组MyD88表达的含量均增加（P＜0.05）。与DQ组对比,糖皮质激素治疗组肾组织MyD88表达均有降低（P＜0.05）。NF-κB含量:与Ctrl组相比较,各时间节点DQ组、DQ+L-GC 组、DQ+M-GC 组、DQ+H-GC 组NF-κB 表达均增加（P＜0.05）。与 DQ 组对比,糖皮质激素治疗组肾组织NF-κB表达均有降低（P＜0.05）。（6）肾组织NF-κB各时间点相关蛋白表达:与Ctrl组相比,24h、14d和21dGC组、DQ+H-GC组的大鼠肾组织NF-κB通路相关蛋白TLR4、Myd88、IκBα、NF-κB p65表达量无明显变化。DQ组、DQ+L-GC组、DQ+M-GC组组大鼠肾组织NF-κB通路相关蛋白TLR4、Myd88、NF-κB p65表达量显著增加,IκBα表达量显著减少（P＜0.05）。3d和7d时,GC组大鼠肾组织NF-κB通路相关蛋白TLR4、Myd88、IκBα、NF-κB p65表达量无明显变化。DQ组、DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组大鼠肾组织NF-κB 通路相关蛋白 TLR4、Myd88、NF-κB p65 表达量显著增加,IκBα 表达量显著减少（P＜0.05）。在敌草快染毒后,与DQ组相比,24h、3d、7d、14d、21d时,DQ+L-GC组、DQ+M-GC组、DQ+H-GC组大鼠肾组织NF-κB通路相关蛋白TLR4、Myd88、NF-κB p65表达量降低,差异无统计学意义（P＞0.05）。除7dDQ+H-GC组、14d、21dDQ+M-GC组、DQ+H-GC组外,IκBα蛋白表达量增加（P＜0.05）。研究结论（1）敌草快可引起大鼠肾脏损害,主要表现为肾小管萎缩,上皮细胞水肿,毛细血管淤血扩张,并且肾功能损害指标有不同程度的提高。（2）糖皮质激素对敌草快染毒大鼠急性肾损伤具有治疗作用。敌草快急性肾损伤治疗过程中,糖皮质激素的使用达到4.2 mg/kg后增加剂量其疗效并不随之增加。（3）TLR4受体介导的TLR4/Myd88/NF-κB信号通路参与了敌草快中毒大鼠急性肾损伤的炎症反应。糖皮质激素能够通过抑制炎症反应,从而影响TLR4/Myd88/NF-κB信号通路相关蛋白的表达。