研究目的本课题拟研究人晶状体上皮细胞（Lens epithelial cell,LEC）雌激素受体表达的情况及中药植物雌激素异补骨脂素（Isopsoralen）和蜕皮甾酮（Ecdysterone）对受体表达的影响,并探讨其细胞信号转导机制,为中药植物雌激素防治老年性白内障提供科学的实验依据。研究方法本研究采用ECR和ISR与人晶状体上皮细胞（HLEC）共同孵育,以雌二醇（β-Estradiol,E₂）作为阳性对照,再用H₂O₂对HLEC造成氧化损伤后,进行下列研究。1.采用流式细胞术（Flow Cytometer,FCM）检测不同浓度的ECR和ISR作用于经H₂O₂处理的HLEC的雌激素受体a（estrogen receptor a,ERa）蛋白的表达变化,探讨ECR和ISR对HLEC的抗氧化损伤作用及机制;2.采用流式细胞术（Flow Cytometer,FCM）检测不同浓度的ECR和ISR作用于经H₂O₂处理的HLEC的雌激素受体β（estrogen receptorβ,ERβ）蛋白的表达变化,探讨ECR和ISR对HLEC的抗氧化损伤作用及机制;3.采用流式细胞术（Flow Cytometer,FCM）检测一定浓度的ECR和ISR作用于经H₂O₂处理的HLEC的磷酸化的ERK蛋白的表达变化,探讨ECR和ISR对HLEC的抗氧化损伤的细胞信号转导机制。研究结果一、FCM检测经H₂O₂处理的HLEC上ERa蛋白的表达1.正常HLEC内存在ERa的表达;2.H₂O₂组HLEC内ERa表达明显下降,与空白组比较有非常显著性差异（p＜0.01）;3.E₂、ECR、ISR高中低浓度组的HLEC内ERa表达明显升高,与H₂O₂组比较有非常显著性的差异（p＜0.01）;且随ECR和ISR浓度的增高HLEC内ERa表达逐渐升高,并呈明显的浓度依赖关系。二、FCM检测经H₂O₂处理的HLEC上ERβ蛋白的表达1.正常HLEC内存在ERβ的表达;2.H₂O₂组HIEC内ERβ表达明显下降,与空白组比较有非常显著性差异（p＜0.01）;3.E₂、ECR、ISR高中低浓度组的HLEC内ERβ表达明显升高,与H₂O₂组比较有非常显著性的差异（p＜0.01）;且随ECR和ISR浓度的增高HLEC内ERβ表达逐渐升高,并呈明显的浓度依赖关系。三、FCM检测经H₂O₂处理的HLEC上不同时段的磷酸化的ERK蛋白表达1、正常HLEC内存在p-ERK的表达,并在6h时出现峰值。2、H₂O₂作用于HLEC后,HLEC内p-ERK的表达量随作用时间延长呈逐渐下降趋势,在0.5h时其值显著高于正常组;H₂O₂用1h时后,其值显著低于正常组,各时段值与空白组比较有显著性差异（p＜0.01）;3、E₂作用于HLEC以后,HLEC内p-ERK的表达随作用时间延长呈逐渐升高,6h后各时段p-ERK表达量显著高于同时段H₂O₂组（p＜0.01）,且在6h时出现峰值;4、中浓度ECR作用于HLEC 3h以后,各时段p-ERK表达量较同时段H₂O₂组显著升高（p＜0.01）,且在12h时出现峰值;5、中浓度ISR作用于HLEC1h以后,各时段p-ERK表达量较同时段H₂O₂组显著升高（p＜0.01）,且在1h时出现峰值。研究结论1.正常HLEC上存在ERα、ERβ、p-ERK表达。2.H₂O₂能下调HLEC的ERα、ERβ表达。3.E₂、ECR、ISR能上调经H₂O₂处理的HLEC的ERα、ERβ表达,并呈明显的浓度依赖关系:E₂、ECR、ISR的抗氧化损伤作用,可能是通过上调经HLEC的ERα、ERβ表达实现的。4.经H₂O₂处理的p-ERK表达量随时间的延长而减少。5.E₂、ECR、ISR各组p-ERK表达量分别在作用6h、12h、1h时达到高峰。6.E₂、ECR、ISR的抗氧化损伤作用,可能与ERK/MAPK信号通路有关。