论文部分内容阅读
近年来的研究表明,细胞凋亡与许多疾病的发生有着极其密切的关系,许多角膜病均是由活性氧导致角膜内皮细胞凋亡所引起的。目前对活性氧诱导人角膜内皮细胞(HCECs)凋亡的研究主要是通过临床实验进行的,耗资大且耗时多,在很大程度上限制了角膜病研究的范围及进程。本文以人角膜内皮细胞系为材料,采用细胞形态观察、吖啶橙/溴化乙锭双染色、DNA电泳及酶联免疫吸附测定(ELISA)等实验技术手段,在体外对过氧化氢(H2O2)和黄酮对HCECs凋亡的影响及黄酮抗氧化的分子机理进行了初步研究,以期为HCECs凋亡所致角膜病的临床治疗提供理论依据。不同浓度H2O2对体外培养HCECs作用的研究结果显示,经200-800μmol/L H2O2处理的HCECs在形态学、吖啶橙/溴化乙锭双染色及DNA电泳检测中均不同程度地表现出凋亡特征,且HCECs的凋亡程度与H2O2的浓度和作用时间呈明显的正相关性。浓度为800μmol/L的H2O2作用10h后,HCECs的凋亡程度极为显著。经检测,凋亡HCECs的DNA在琼脂糖凝胶电泳中出现了明显的梯状条带。不同浓度黄酮对体外培养HCECs作用的实验结果发现,黄酮在浓度为55和70μmol/L时,不能引起HCECs凋亡,而在85和100μmol/L的浓度下能诱导HCECs凋亡,在此浓度范围内,凋亡程度与黄酮的浓度和作用时间呈正相关性。浓度为85μmol/L的黄酮作用8h后,HCECs的凋亡程度非常显著;经检测,凋亡HCECs的DNA出现了断片化。黄酮预处理对H2O2引起的HCECs凋亡的影响作用结果表明,55和70μmol/L黄酮的预处理对600μmol/L H2O2引起的HCECs凋亡具有显著的抑制作用,而85和100μmol/L黄酮的预处理则不能抑制H2O2引起的HCECs凋亡。其中,70μmol/L黄酮预处理对H2O2引起的HCECs凋亡的抑制作用非常显著,HCECs的DNA没有出现断片化。可见,黄酮在大约70μmol/L的较低浓度下对HCECs有强烈的抗氧化保护作用,而在高浓度下则没有抗氧化作用。为了初步查清黄酮抑制H2O2引起HCECs凋亡的分子途径及其作用机理,本文利用凋亡