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目的:腹泻病是常见病、多发病,全球每年死于腹泻相关疾病或其并发症的儿童达上百万。腹泻病毒的感染是腹泻病的主要病因,而导致病毒性腹泻的病毒主要有札如病毒、A组轮状病毒、B组轮状病毒、星状病毒、I型诺如病毒、Ⅱ型诺如病毒、肠道腺病毒。腹泻病毒具有潜伏期短、传染性强、易爆发等特点,而且目前尚无特效的药物对抗腹泻病毒,因此快速准确地检测病毒在腹泻病的治疗和预防上显得尤为重要。目前腹泻病毒的检测方法主要有电镜法、免疫学检测、PCR法等,但这些方法均无法达到高通量的检测。本文旨在建立一种7种腹泻病毒化学发光基因芯片检测方法,该芯片能够同时检测7种腹泻病毒,大大缩短了检测时间,增加了检测通量,提高了检测效率,为腹泻病毒的检测提供一种新的高通量检测手段。方法:1、调研文献确定本研究拟检测的病原体及病原体靶基因。2、收集病原体样本,对无临床样本的B组轮状病毒,通过人工合成其靶基因。3、利用Clustalx1.8.msw Alignmen、Primer5.0等生物学软件设计引物与探针,并合成、筛选特异的引物与探针。4、优化多重RT-PCR体系。5、制备质粒参考品、体外转录RNA参考品,在优化好的多重RT-PCR体系和芯片杂交条件下,评价芯片的特异性、灵敏度、重复性,检测100例临床样本,评价芯片的实用性。结果:1、调研文献确定拟检测的7种腹泻病毒,札如病毒、A组轮状病毒、B组轮状病毒、I型诺如病毒、Ⅱ型诺如病毒、星状病毒、肠道腺病毒及其靶基因。2、共筛选出7对特异性引物和12条特异性探针。3、完成7种腹泻病毒质粒参考品的构建,并以质粒参考品为模板,构建了7种腹泻病毒体外转录RNA参考品。4、为了保证每个靶基因在多重RT-PCR体系中的扩增效率,针对体系引物组合、引物浓度配比等条件对多重RT-PCR体系进行了优化。最终分为A、B两组多重RT-PCR体系,建立了腹泻病毒化学发光基因芯片检测方法。5、为验证方法的可靠性,以制备好的体外转录RNA参考品为模板,在优化好的RT-PCR体系和芯片杂交条件下对该芯片的特异性、灵敏度和重复性进行考核。结果显示,该芯片检测体外转录RNA参考品的灵敏度为3.0×103copies/μl;特异性良好,无交叉现象,能很好的区分上述7种腹泻病毒。检测100例临床样本的灵敏度为95.2%、特异性为92.1%、符合率为95.1%。结论:本文建立了一种腹泻病毒化学发光基因芯片检测方法,利用该方法能够同时检测7种腹泻病毒。芯片性能考核结果显示,该芯片的特异性、灵敏度和重复性均达到预期的性能要求。该方法的建立为腹泻病毒的临床诊断和流行病学调查等提供了新的高通量检测方法。