瓜实蝇卵伴生细菌对寄主的影响及其在寄主上的多样性分析

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昆虫体内是一个复杂的微生态系统,存在大量的微生物,这些微生物对宿主的生长发育、环境适应性和防御等方面起着重要的作用。瓜实蝇是瓜类作物上的重要害虫,成虫以瓜果蜜露为食物,幼虫取食腐败的瓜果,瓜实蝇生活环境中的微生物与成虫、幼虫生长发育及取食间的关系倍受关注。本文以瓜实蝇卵伴生菌为研究对象,运用生物测定方法初步探究了瓜实蝇卵伴生菌对瓜实蝇、寄主植物的影响;利用16S高通量测序技术,比较分析了瓜实蝇卵巢、新鲜卵和丝瓜上幼虫伴生细菌的种群构成和丰度;成功分离出能影响丝瓜中瓜实蝇卵到幼虫和蛹的生长发育的菌株3株。主要研究结果如下:1、瓜实蝇卵伴生菌对寄主植物的影响瓜实蝇卵伴生菌能促进丝瓜腐烂,不能促进南瓜腐烂。72 h-120 h时瓜实蝇卵洗脱液处理组中丝瓜的腐烂面积显著高于无菌水和丝瓜无菌水冲洗液处理的腐烂面积,瓜实蝇卵洗脱液处理组中南瓜的腐烂面积与无菌水和丝瓜无菌水冲洗液中南瓜的腐烂面积均无显著差异,说明瓜实蝇卵洗脱液中含有的物质能加速丝瓜腐烂、不能加速南瓜腐烂。2、瓜实蝇卵伴生细菌对瓜实蝇幼虫和蛹生长发育的影响瓜实蝇卵伴生细菌能影响丝瓜中瓜实蝇卵到幼虫和蛹的生长发育,不影响南瓜中瓜实蝇卵到幼虫和蛹的生长发育。采用氨苄青霉素或链霉素处理瓜实蝇卵后,瓜实蝇卵在寄主丝瓜中生长发育到幼虫和蛹时的重量均显著低于对照组的幼虫和蛹的重量,瓜实蝇卵在寄主南瓜中生长发育到幼虫和蛹的重量与对照相比无显著差异。3、瓜实蝇卵巢、卵、幼虫伴生细菌的多样性分析通过对卵巢、新鲜卵、丝瓜上幼虫伴生菌的高通量测序明确了卵巢、卵和幼虫中伴生细菌的多样性。卵巢和卵两者间的细菌种类相似,但丰度略有不同。丝瓜上幼虫的伴生细菌种类和丰度与卵巢、新鲜卵的伴生菌均有所不同。在属水平上,在卵巢、新鲜卵和丝瓜幼虫的伴生细菌中都存在芽胞杆菌属Bacillus、克雷伯氏菌属Klebsiella、柠檬酸杆菌属Citrobacter、大肠杆菌志贺菌属Escherichia-shigella、肠球菌属Enterococcus和不动菌属Acinetobactor等属;而芽胞杆菌属Bacillus、克雷伯氏杆菌属Klebsiella和柠檬酸杆菌属Citrobacter在幼虫上的相对丰度比在卵巢、新鲜卵上的相对丰度显著增加。4、瓜实蝇卵伴生细菌的分离、鉴定及功能验证对瓜实蝇卵伴生细菌进行了分离、筛选,以丝瓜的腐烂面积为依据从分离出的30个单菌落中筛选出8个菌株并进行了鉴定,最后将目标菌株与经链霉素处理的瓜实蝇卵在丝瓜上接种并检测;明确了肺炎克雷伯氏杆菌Klebsiella pneumoniae、产气克雷伯氏杆菌Klebsiella aerogenes和弗氏柠檬酸杆菌Citrobacter freundii这3种伴生细菌在丝瓜中可影响瓜实蝇卵到幼虫和蛹的生长发育,可促进寄主丝瓜的腐烂。
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