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目的:1.从荣气理论溯源,结合中医理论与病理生理学机制,探讨荣气气化与脑梗死后血管新生的理论相关性。2.采用网络药理学与生物信息学方法,构建脑梗死后血管新生“TF-miRNA”反馈环,探讨活血荣络方脑梗死后血管新生的分子机制。3.以“TF-miRNA”反馈环为基础,结合网络药理学预测结果,从体内实验探讨活血荣络方促脑梗死后血管新生的作用机制。方法:1.生物信息学研究:（1）脑梗死“TF-miRNA”反馈环构建:通过GEO数据库,下载脑梗死miRNA（GSE97532）与m RNA（GSE119121）芯片数据;采用R语言“limma”包,获取DEMs与DEGs;通过Target Scans、Starbase数据库预测DEMs下游靶基因;通过TransmiR v2.0数据库预测DEMs上游TFs;取“DEGs”、“下游靶基因”、“上游TFs”三者交集,根据聚焦的特定TF,结合TransmiR v2.0数据库,检索出特定miRNA,构建出“TF-miRNA”反馈环。（2）活血荣络方促脑梗死后血管新生网络药理学研究:通过TCMSP数据库,初步筛选出活血荣络方代表中药的有效组分;通过Pub Chem、Chem Spider数据库,获取有效组分化合物结构式;通过Swiss数据库预测活血荣络方有效中药靶点;通过Gene Cards数据库,获取“脑梗死”、“血管新生”的疾病靶点;取中药靶点与疾病靶点的交集,获得共同靶点,即活血荣络方促脑梗死后血管新生的靶点;通过String、DAVID及Cytoscape软件对共同靶点进行PPI、GO、KEGG富集分析。2.体内实验:将SD大鼠随机分成假手术组、模型组、活血荣络方组（11.7g/kg）和丁苯酞（60mg/kg）组,每组10只,建立MCAO/R模型,连续ig药物7d。采用改良神经功能缺损评分（mNSS）、HE染色、Nissl染色分别评价各组大鼠神经功能、病理及尼氏小体情况;采用免疫荧光染色观察CD34及VEGF表达;采用RT-q PCR法检测“TF-miRNA”反馈环相关基因KLF4、VEGF m RNA及miR-206表达;采用Western blotting法检测各组大鼠梗死侧脑组织中KLF4和VEGF蛋白表达情况。结果:1.生物信息学研究:（1）采用R语言“limma”包对GSE97532、GSE119121表达矩阵差异分析,DEMs共36个,27个miRNA高表达,9个miRNA低表达,DEGs共271个,169个m RNA高表达,102个m RNA低表达;Target Scans、Starbase数据库预测出36个DEMs下游靶基因13764个,TransmiR数据库预测出36个DEMs上游TFs共309个;取“DEGs”、“下游靶基因”、“上游TFs”三者交集,共获得5个脑梗死相关转录因子差异基因（KLF4、KLF5、HMGN3、EBF1、TLR2）;结合TransmiR v2.0对应关系,初步构建出“KLF4-miR-206”、“KLF4-miR-544”、“KLF4-miR-429”、“KLF5-miR-429”、“EBF1-miR-429”5个“TF-miRNA”反馈环。（2）初步筛选出活血荣络方422个有效组分、1028个有效中药靶点;脑梗死后血管新生169个疾病靶点,共同靶点42个;PPI结果显示IL-6、TNF、AKT1、CASP3相互作用最明显,GO、KEGG富集分析结果显示:活血荣络方主要介导HIF-1信号通路、TNF信号通路、能量代谢通路、m TOR信号通路等,调控氧化应激、细胞凋亡、内皮细胞增殖等生物进程,发挥促脑梗死后血管新生的作用。2.体内实验:（1）改良神经功能缺损评分:与假手术组比较,模型组1、3、7 d mNSS评分显著升高（P＜0.01）,神经功能缺损严重;与模型组比较,活血荣络方组、丁苯酞组1 d评分无明显变化（P＞0.05）,神经功能缺损无明显改善,3、7 d评分显著降低（P＜0.01）,神经功能缺损明显改善。（2）HE、Nissl染色:与假手术组比较,模型组神经元病理损伤及尼氏小体数目显著降低（P＜0.01）;与模型组比较,活血荣络方组、丁苯酞组病理损伤及尼氏小体数目增多（P＜0.01或P＜0.05）。（3）CD34和VEGF免疫荧光染色:与假手术组比较,模型组海马区MVD和皮质区VEGF显著升高（P＜0.01）;与模型组比较,活血荣络方组、丁苯酞组海马区MVD、皮质区VEGF阳性表达显著升高（P＜0.01）;活血荣络方组与丁苯酞组无统计学意义（P＞0.05）。（4）“TF-miRNA”反馈环相关miRNA、m RNA表达:与假手术组比较,模型组KLF4、VEGF m RNA、miR-206表达升高（P＜0.01）;与模型组比较,活血荣络方组、丁苯酞组KLF4、VEGF表达表达升高（P＜0.01或P＜0.05）,miR-206、表达降低（P＜0.01）。（5）KLF4/VEGF轴蛋白表达:与假手术组比较,模型组KLF4、VEGF蛋白表达水平显著升高（P＜0.01）;与模型组比较,活血荣络方组、丁苯酞组KLF4、VEGF蛋白表达均进一步升高（P＜0.01）。结论:1.理论探讨:荣气虚滞是脑梗死后血管新生不足的理论基础,荣气气化的“精化气-气生变-变成形”过程能针对性启动或促进脑梗死内源性血管新生。在荣气理论指导下,基于活血荣络法拟方的活血荣络方能促脑梗死后血管新生。从中医理论角度丰富了荣气理论,为进一步开发活血荣络方提供理论依据,为防治脑梗死疾病提供了科学理论及实践依据。2.生物信息学研究:（1）脑梗死疾病发生后,KLF4、KLF5、EBF1等转录因子表达上调,可能形成“KLF4-miR-206”、“KLF4-miR-544”、“KLF4-miR-429”、“KLF5-miR-429”、“EBF1-miR-429”5个“TF-miRNA”反馈环模式,共同调控脑梗死的预后。（2）活血荣络方能影响IL-6、TNF、AKT1、CASP3等蛋白的相互作用,介导HIF-1信号通路、TNF信号通路、能量代谢通路等,调控氧化应激、细胞凋亡、内皮细胞增殖等过程,发挥促脑梗死后血管新生的作用。3.体内实验:活血荣络方能上调转录因子KLF4,下调miR-206的表达,打破脑梗死大鼠中存在的“KLF4-miR-206”反馈环,负反馈上调KLF4蛋白表达,激活VEGF信号通路,促脑梗死血管新生,增加尼氏小体数目,改善病理状态及神经功能缺损症状,发挥神经保护作用。