【摘 要】
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脂肪含量决定着猪肉的品质,前体脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞是一个受多种转录因子调控的网络过程。长链非编码RNA（lncRNA）是指一类主要由PolⅡ转录且长度大于200 nt不具有或有很弱编码能力的RNA,已经证实lncRNA能够通过多种方式参与脂肪形成过程。目前关于成脂分化相关lncRNA的研究已有初步进展,但多集中在人和鼠中,在猪上的研究鲜有报道。本研究通过分析课题组前期转录组测序数据发现了一个
【基金项目】
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国家自然科学基金（31872336）； 三晋学者支持计划专项经费资助（2016-2017）； 山西省“1331 工程”资助（2019）； 山西省研究生教育创新项目资助（No.2020SY199）；
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脂肪含量决定着猪肉的品质,前体脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞是一个受多种转录因子调控的网络过程。长链非编码RNA（lncRNA）是指一类主要由PolⅡ转录且长度大于200 nt不具有或有很弱编码能力的RNA,已经证实lncRNA能够通过多种方式参与脂肪形成过程。目前关于成脂分化相关lncRNA的研究已有初步进展,但多集中在人和鼠中,在猪上的研究鲜有报道。本研究通过分析课题组前期转录组测序数据发现了一个新的长链非编码RNA lnc-88672及其靶基因MYOZ2,通过生物信息学预测发现该lncRNA可能在脂质代谢过程中发挥作用。通过沉默lnc-88672研究其对猪前体脂肪细胞成脂分化的影响;利用RNA pull-down技术寻找能够与lnc-88672结合的蛋白;采用BSP技术分析沉默lnc-88672后对MYOZ2基因甲基化程度的影响;沉默MYOZ2后检测其对成脂分化的影响;利用STRING数据库构建MYOZ2相关蛋白互作网络图以进一步探究其发挥功能的作用机制。研究结果如下:1、通过NCBI分析发现lnc-88672位于猪8号染色体上,不具备蛋白质编码的能力。核质分离结果显示,lnc-88672在细胞核与细胞质中均存在表达,且细胞核中的分布高于细胞质。利用PCR扩增获得长为487 bp的lnc-88672部分序列。q RT-PCR结果显示lnc-88672在背最长肌中表达最高,在皮下脂肪、腰大肌、股二头肌等组织中也存在表达。通过生物信息学预测发现lnc-88672可能参与脂质代谢过程。2、在猪前体脂肪细胞中沉默lnc-88672后,q RT-PCR结果显示PPARγ、FABP4的表达均极显著降低（P＜0.01）,Western印迹结果表明PPARγ蛋白含量显著降低（P＜0.05）,油红O染色发现脂滴数明显减少,证明沉默lnc-88672能够抑制成脂分化。3、通过RNA pull-down技术发现lnc-88672能够与AHCY蛋白结合,并影响其下游靶基因DNMT1的表达。利用BSP和q RT-PCR技术发现沉默lnc-88672后MYOZ2基因的DNA甲基化程度升高,表达量降低。4、沉默MYOZ2基因能够抑制成脂分化。在探究MYOZ2影响成脂分化的作用机制时发现MYOZ2能够通过MYOZ2-TCAP-PPARγ发挥作用,进而调控脂肪代谢相关基因。综上所述,本研究发现了一个猪的新lncRNA lnc-88672,初步证明lnc-88672通过与AHCY相互作用,并影响其下游基因DNMT1的表达,从而使MYOZ2基因的甲基化程度发生改变,影响MYOZ2的表达,MYOZ2通过MYOZ2-TCAP-PPARγ途径影响成脂关键基因PPARγ和FABP4的表达,进而调控脂肪酸代谢相关基因SCD、FASN、SREBP1、NR1H3、DGAT1、PNPLA2、HSL、CES1、CPT1,在成脂分化过程中发挥重要作用。
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