【摘 要】
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ScFvA11是该实验室利用噬菌体表面呈现技术筛选到一株对人纤维蛋白特异的鼠单链抗体,而且以该鼠抗体为基础,构建和表达了单链抗体-低分子量尿激酶融合基因.动物试验表明,在达
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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ScFvA11是该实验室利用噬菌体表面呈现技术筛选到一株对人纤维蛋白特异的鼠单链抗体,而且以该鼠抗体为基础,构建和表达了单链抗体-低分子量尿激酶融合基因.动物试验表明,在达到相同的溶栓效果时,单链抗体-尿激酶融合蛋白的用量只是尿激酶且量的1/4,显示该融合蛋白具有较好的体内导向溶栓效果,有很好的应用前景.为降低鼠抗体的免疫原性,该实验室已采用表面重塑(surface reshaping)的人源化方案对该鼠抗体进行了第一次人源化.第一次人源化后,人源化抗体重链框架区与人源性抗体模板(HSVHIF)的同源性达到86﹪,人源化抗体轻链框架区与人源性抗体模板(KV3L-H)的同源性达到75﹪,经在大肠杆表达和对表达产物的纯化及活性分析,结果表明人源化单链抗体具有与亲本鼠抗体相拟的体外活性.在该研究中,为了进一步提高人源化抗体轻链的人源化程度,在对鼠单链抗体的结构进行分子模建的基础上,参照大量成功人源化的实例对该鼠抗体轻链进行了第二次人源化.二次人源化之后,轻链框架区与人源性模板的同源性达到90﹪.根据二次人源化轻链的氨基酸序列设计并合成了轻链的核苷酸序列,然后用PCR方法构建出轻链基因,并与一次人源化的重链基因拼接而得到完整的二次人源化单链抗体基因,经测序,克隆序列与设计序列完全一致.
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