论文部分内容阅读
大量证据表明,摄入植物性食物特别是蔬菜和水果,能够降低各种癌症的发病风险。植物性食物含有的多种生物活性物质(植物化学成分),是其发挥抗癌活性的重要成分。类黄酮化合物是广泛存在于食用性植物中的多酚类化合物。许多体内外研究、流行病学调查以及某些临床应用结果表明,类黄酮化合物对于癌症的预防和治疗具有积极作用。但是,类黄酮化合物发挥抗癌活性的内在分子机制,仍有待进一步研究、完善。世界范围内,食管癌在恶性肿瘤中排位第九,约占胃肠癌发病总数的7%,是所有肿瘤中最具致死性的癌症之一。大量流行病学研究结果表明,食管癌的发生不仅与饮酒、吸烟、致癌物的摄入以及热损伤直接相关,而且与食物中蔬菜和水果的摄入不足存在密切关系。膳食类黄酮化合物作为蔬菜和水果中的生物活性成分,很可能会为食管癌的预防带来新的希望。本课题研究化学结构相似的两类黄酮和黄酮醇化合物对人食管鳞癌细胞系KYSE-510细胞和人食管腺癌细胞系OE33细胞的分化诱导作用。MTT分析结果表明,黄酮化合物(黄岑黄素和白杨素)和黄酮醇化合物(高良姜素和山奈酚),均能以剂量-效应和时间-效应依赖方式,抑制KYSE-510和OE33细胞增殖,呈现一定的抑制活性。它们对KYSE-510和OE33细胞增殖的抑制活性顺序为:高良姜素>白杨素>黄岑黄素>山奈酚。普通光学显微镜观察显示,KYSE-510和OE33细胞经黄酮和黄酮醇化合物作用后,呈现细胞分化相关的典型形态学特征;激光共聚焦显微镜和流式细胞仪结果显示,黄酮和黄酮醇化合物可分别诱导KYSE-510细胞和OE33细胞分化标记角蛋白8和c-erbB-2表达升高;real-time荧光定量RT-PCR对端粒酶逆转录酶检测结果显示,黄酮和黄酮醇化合物作用后,端粒酶逆转录酶表达量降低,表明4种化合物均能够诱导KYSE-510和OE33细胞发生细胞分化。黄酮和黄酮醇化合物对两株食管癌细胞的分化诱导活性顺序,与其细胞增殖抑制活性强弱顺序几乎完全一致,表明黄酮化合物和黄酮醇化合物可通过诱导细胞分化,实现对两株人食管癌细胞增殖的有效抑制。采用荧光定量Real Time-PCR对KYSE-510细胞和OE33细胞中的3个基因的mRNA表达水平进行分析,并比较4种类黄酮化合物对各基因表达的调控能力。各基因表达的荧光定量Real Time-PCR分析结果显示,黄酮化合物和黄酮醇化合物对3个基因(p21wafl、cyclin B1和cyclin D1)表达均具有调控活性,其中,黄酮化合物和黄酮醇化合物增加p21wafl的表达,抑制cyclin B1和cyclin D1的表达;在OE33细胞中,黄酮化合物和黄酮醇化合物对3个基因(14-3-3σ、cyclin B1和cyclin D1)表达的具有调控活性,其中,黄酮化合物和黄酮醇化合物增加14-3-3σ的表达,抑制cyclin B1和cyclin D1的表达。上述结果说明,KYSE-510细胞中的p21wafl、cyclin B1和cyclin D1以及OE33细胞中的14-3-3σ、cyclin B1和cyclin D1为介导黄酮和黄酮醇化合物诱导细胞分化的目标基因。为确定上述目标基因的mRNA表达水平改变是否最终导致相应蛋白的表达水平变化,采用Western-blot检测上述目标基因的蛋白表达水平。检测结果表明,黄酮和黄酮醇化合物可增加KYSE-510细胞国p21wafl的蛋白表达并抑制cyclin B1和cyclin D1的蛋白表达;住OE33细胞中,增加14-3-3σ的蛋白表达并抑制cyclin B1和cyclin D1的蛋白表达。推测上述基因可能是黄酮和黄酮醇化合物实现细胞分化诱导作用的基因。