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为研究pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP基因佐剂对鸡球虫疫苗免疫增效作用的机制,本试验通过检测比较使用和不使用pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP的鸡球虫病三价四株活疫苗免疫鸡的免疫器官（胸腺、脾脏、法氏囊）和肠道（十二指肠、空肠、盲肠扁桃体）中激活的T淋巴细胞、B淋巴细胞、抗原呈递细胞数量变化及白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素4（IL-4）、γ-干扰素（IFN-γ）和α-肿瘤坏死因子（TNF-α）的m RNA含量和蛋白含量以及新城疫（ND）、禽流感（AI）的抗体水平,探讨pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP基因佐剂的免疫增效机制。试验结果发现:（1）接种后7 d,佐剂组（T1组）胸腺髓质、盲肠扁桃体固有层和脾小结中激活的T细胞数量显著或极显著（P＜0.05或P＜0.01）高于疫苗组（C1组）和空白组（C0组）;接种后14 d,T1组激活的T细胞数量在肠道（十二指肠、空肠和盲肠扁桃体）固有层、胸腺髓质、脾小结、动脉周围淋巴鞘和脾索中均显著或极显著（P＜0.05或P＜0.01）高于C1组和C0组;接种后28 d,T1组激活的T细胞数量在肠道固有层、胸腺髓质和脾索中显著或极显著高于（P＜0.05或P＜0.01）C1组和C0组。（2）接种后7 d,T1组鸡空肠和盲肠扁桃体固有层、胸腺皮质、脾索和法氏囊髓质中活化的B细胞数量显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于C1组和C0组;接种后14 d和28 d,T1组鸡三个肠段固有层、胸腺皮质、脾小结和法氏囊（皮质、髓质）中活化的B细胞数量显著或极显著（P＜0.05或P＜0.01）高于C1组和C0组。（3）接种后7 d,T1组盲肠扁桃体绒毛固有层中抗原呈递细胞数量显著高于（P＜0.05）C1组,极显著（P＜0.01）高于C0组;接种后14 d,T1组十二指肠和盲肠扁桃体绒毛固有层和脾小结中抗原呈递细胞数量显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于C1组和C0组;接种后28 d,T1组在三个肠段绒毛固有层、胸腺髓质、脾小结、法氏囊皮质和髓质中抗原呈递细胞数量显著或极显著（P＜0.05或P＜0.01）高于C1组和C0组。（4）接种7 d,T1组和C1组新城疫和禽流感抗体效价均差异不显著（P＞0.05）;接种后14 d,T1组新城疫抗体效价显著（P＜0.05）大于C1组,极显著（P＜0.01）大于C0组,禽流感抗体效价差异不显著;接种后28 d,T1组新城疫和禽流感抗体效价显著或极显著（P＜0.05或P＜0.01）高于C1组和C0组。（5）采用酶联免疫吸附测定试验（ELISA）检测发现:接种后7 d,T1组IL-4蛋白水平显著或极显著高于（P＜0.05或P＜0.01）C1组和C0组;接种后14 d,C1组γ-IFN蛋白水平极显著高于（P＜0.01）T1组和C0组;接种后28 d,T1组IL-2、IL-4、γ-IFN和α-TNF蛋白水平显著或极显著（P＜0.05或P＜0.01）高于C1组和C0组。（6）荧光定量PCR检测发现:接种后7 d,T1组鸡IL-2 m RNA的表达量在肌肉和脾脏中显著大于（P＜0.05）C1组,IL-4 m RNA在肌肉和盲肠扁桃体中显著大于（P＜0.05）C1组和C0组,IFN-γm RNA在盲肠扁桃体中分别显著（P＜0.05）和极显著（P＜0.01）大于C1组和C0组;接种后14 d,T1组IL-2 m RNA在肌肉、脾脏、空肠和盲肠扁桃体中显著或极显著（P＜0.05或P＜0.01）大于C1组和C0组,IL-4 m RNA在肌肉、脾脏和空肠中显著或极显著大于（P＜0.05或P＜0.01）C1组,IFN-γm RNA在空肠和盲肠扁桃体中显著或极显著（P＜0.05或P＜0.01）大于C1组和C0组,TNF-αm RNA在肝脏、脾脏、空肠和盲肠扁桃体中显著或极显著（P＜0.05或P＜0.01）大于C1组和C0组;接种后28 d,T1组IL-2 m RNA在空肠、肝脏和盲肠扁桃体中显著或极显著大于（P＜0.05或P＜0.01）C1组,T1组IL-4和IFN-γ在肝脏、脾脏、空肠和盲肠扁桃体中显著或极显著大于（P＜0.05或P＜0.01）C1组和C0组,TNF-αm RNA在肝脏、脾脏和盲肠扁桃体中显著或极显著大于（P＜0.05或P＜0.01）C1组和C0组。总之,基因佐剂pCI-chIL-4-chIL-2-EGFP能促进十二指肠、空肠、盲肠扁桃体、脾脏、胸腺或法氏囊中T细胞和B细胞的增殖和活化,促进抗原呈递细胞MHC-II类分子的表达。基因佐剂可提高鸡体IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α基因表达,也可以提高鸡新城疫和禽流感疫苗免疫抗体效价。