背景:原发性肝癌为我国常见的恶性肿瘤,其死亡率在消化系统恶性肿瘤中列第三位。据统计我国每年约有11万人死于肝癌,占全球肝癌死亡数的45%左右。临床多采用手术、放疗、化疗及生物和免疫疗法,但晚期患者由于癌细胞的扩散而治愈率较低。肝癌的肝外扩散多通过淋巴道转移至肝门淋巴结、上腹部淋巴结和腹膜后淋巴结。因此,探索和研究其淋巴道转移的机制及其相关分子,对于改善患者预后,降低肝癌死亡率有重要意义。有研究发现CLIC1,即氯离子通道蛋白1,在某些恶性肿瘤的肿瘤细胞中表达增强,特别与肝癌、胃癌和胆囊癌的淋巴道侵袭能力密切相关。由此提示,CLIC1可能参与肿瘤的发生及淋巴道转移过程。本课题组克隆了来源于同一亲本细胞、但淋巴道转移能力明显不同的小鼠肝癌腹水型细胞株即Hca-F细胞株和Hca-P细胞株,其中Hca-F是具有高转移潜能的细胞株,淋巴结转移率高于70%;Hca-P是低转移潜能细胞株,淋巴结转移率低于30%。随后利用抑制性消减杂交技术和基因芯片技术发现在基因和蛋白质水平上,CLIC1在Hca-F细胞株中的表达水平均高于Hca-P细胞株。目的:1.检测CLIC1基因经RNA干扰后的表达变化,CLIC1基因干扰后GSN、PKC-α及Annexin A7的表达情况。2.检测Annexin A7基因下调及上调后CLIC1、GSN的表达情况。3.探索与CLIC1作用相关的基因及分子通路,并分析其作用机制。方法:用免疫印迹方法检测:1. F_{C无关序列}和F_C下调细胞的CLIC1、GSN、PKC-α及Annexin A7的表达强度差异;2. FA7无关序列细胞、F_A7下调细胞、PA7无关序列细胞、F_A7上调细胞及小鼠足垫原发肿瘤的CLIC1、GSN的表达强度差异。结果:1. （1）体外培养的FC无关序列细胞和FC下调细胞均有CLIC1、GSN、PKC-α及Annexin A7的表达。（2）CLIC1基因干扰后,FC下调细胞的CLIC1和PKC-α的表达量与F_{C无关序列}细胞相比降低,P<0.05。（3）CLIC1基因干扰后,F_C下调细胞的GSN和Annexin A7的表达量与F_{C无关序列}细胞相比增高,P<0.05。2. （1）RNA干扰后的F_A7下调细胞内CLIC1的表达量相比F_{A7无关序列}细胞增高,而Annexin A7基因上调后的P_A7上调细胞内的CLIC1的表达量相比P_{A7无关序列}细胞也是增高的,P<0.05。（2）RNA干扰后的F_A7下调细胞内GSN的表达量相比FA7无关序列细胞降低,而Annexin A7基因上调后的P_A7上调细胞内的GSN的表达量相比P_{A7无关序列}细胞是增高的,P<0.05。3. （1）F_A7下调组的肿瘤原发灶内CLIC1的表达量高于F_{A7无关序列}组,P_A7下调组的肿瘤原发灶内CLIC1的表达量低于P_{A7无关序列}组,P<0.05。（4）F_A7下调组的肿瘤原发灶内GSN的表达量低于F_{A7无关序列}组,P_A7下调组的肿瘤原发灶内GSN的表达量高于P_{A7无关序列}组,P<0.05。结论:1.CLIC1基因经RNA干扰后其表达量降低,说明干扰成功。CLIC1下调后的肿瘤细胞,PKC-α的表达量也降低,而GSN和Annexin A7的表达量增高。说明抑制CLIC1的表达后,可调节PKC-α、GSN和Annexin A7的表达。2.体外实验, Annexin A7基因上调和下调表达调控后,CLIC1的表达与对照组比较均增加。体内实验,Annexin A7基因上调和下调表达调控后,CLIC1的表达与Annexin A7的表达呈反向相关;而GSN的表达无论体内还是体外,与Annexin A7的表达呈正向相关。提示Annexin A7可能调控CLIC1和GSN的表达。