川芎嗪对大鼠腹膜粘连及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白和TNF-α、TGF-β1表达的影响

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目的:腹膜粘连是腹部术后常见的并发症,其发生率为67%-93%。而由粘连引起的问题主要有:肠梗阻;女性不孕;慢性腹盆腔疼痛;增加手术的难度和副损伤的发生率等等,并由此消耗大量的医疗和社会资源。然而,虽然预防腹膜粘连的方法很多,但是由于粘连形成机制的复杂性和对其机制了解的局限性,阻碍了对腹膜粘连形成防治的进展,故目前仍然在探索新的途径和方法。川芎嗪(Ligustrazine)是从中药川芎中提取的有效单体制剂,近来发现其具有干扰肺纤维化和皮肤瘢痕形成的作用,而应用川芎嗪防治腹膜粘连的动物实验未见报道,因此本实验通过腹腔内注射川芎嗪来观察其是否影响大鼠腹膜粘连的形成,并进一步检测粘连组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、生长转化因子-β1(TGF-β1)的表达水平和血液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,从而探讨川芎嗪干预大鼠腹膜粘连的效果和机制,为中药单体制剂在预防腹膜粘连方面的应用提供动物实验依据和理论基础。方法:选用清洁级健康雌性S-D(Sprague-Dawley)大鼠30只,体重250±20克。采用盲肠刮擦及切除右侧壁腹膜和腹膜下一层肌肉的方法制作模型,术后选用抽签的方法随机分成模型对照组(M)、注射生理盐水组(N)和注射川芎嗪组(L)三组,川芎嗪组关腹前将川芎嗪注射液0.6ml<WP=4>(约为50mg/kg)注于两创面和腹腔,盐水组注入0.6ml的生理盐水,模型组直接关腹。术后7天行二次开腹手术,观察粘连情况并评分及采集标本。取粘连组织,予常规石蜡包埋及行石蜡切片HE染色,光镜下观察粘连组织病理变化。天狼星玫瑰红-偏振光检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的密度。链霉亲和素免疫组化法(SABC法)检测粘连组织中TNF-α及TGF-β1蛋白的表达量。放免法检测血液中TNF-α的浓度。结果:1.粘连的大体变化和评分结果:模型组盲肠与右侧腹壁粘连紧密,基本为等面积粘连。生理盐水组有部分粘连面积减少。川芎嗪组粘连面积明显减少,川芎嗪组粘连评分结果(2.10±0.99)明显低于模型组(3.80±0.42)和生理盐水组(3.60±0.70)(P<0.05)。2.病理组织学变化:光镜下见模型组浆膜剥离面未修复,间皮细胞不连续,生理盐水组改变类似模型组,川芎嗪组浆膜剥离面多修复,间皮细胞见增生,连续排列。3.模型组和生理盐水组Ⅰ型胶原纤维为大量的红色或黄色的纤维,排列紧密,呈很强的双折光性,密度较高。川芎嗪组Ⅰ型胶原纤维排列稀疏,密度低,其密度值(14.44±2.71)明显低于模型组(33.56±3.53)和生理盐水组(33.84±3.88)(p<0.05)。而模型组、生理盐水组和川芎嗪组3组的Ⅲ型胶原纤维为较多的绿色细纤维,呈网状和弱的双折光性,但3组的Ⅲ型胶原纤维密度值比较,模型组(14.66±2.56)、生理盐水组(15.69±3.41)和川芎嗪组(15.09±3.22)差异无统计学意义(P>0.05)。4.模型组和生理盐水组的TNF-α定位表达粘连组织中的巨噬细胞中,呈较一致的阳性反应,棕黄色的阳性物质都沉积于巨噬细胞的胞浆中。川芎嗪组的TNF-α同样定位表达粘连组织中的巨噬细胞中,但呈<WP=5>现较弱阳性的反应或不表达,其染色强度评分(0.08±0.14)明显低于模型组(1.39±0.61)和生理盐水组(1.32±0.55)(p<0.05)。5.模型组和生理盐水组中均未表达出TGF-β1,但在川芎嗪组却偶见阳性结果,TGF-β1定位表达粘连组织中的巨噬细胞中,棕黄色的阳性物质都沉积于巨噬细胞的胞浆中。6.血液中的TNF-α浓度值在模型组(2.24±0.47)、生理盐水组(2.58±0.38)和川芎嗪组(2.51±0.42)三组之间无显著差别(P>0.05)。结论:1.腹腔内注射川芎嗪可以减低大鼠腹膜粘连的程度,促进腹膜间皮细胞的增生,进而加速腹膜的愈合。2.可以减少粘连组织中Ⅰ型胶原蛋白的表达,但对Ⅲ型胶原蛋白的表达无影响。3.减少粘连组织TNF-α的表达,但对血液中的TNF-α含量无影响。4.可能促进粘连组织中TGF-β1表达,以防止腹膜间皮细胞的过度增殖。
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