论文部分内容阅读
目的: 通过HCMV感染THP-1单核细胞，研究其对HLA-G异构体的差异表达、细胞因子的分泌及细胞凋亡的影响，初步探讨HCMV逃逸机体免疫应答的机制。 方法: 1.HCMV AD169株感染THP-1细胞，以THP-1细胞作为对照。RT-PCR和Western Blot分别检测HLA-G异构体mRNA和蛋白的表达;Flow cytometry检测THP-1细胞表面HLA-G、ILT2和ILT4的表达;并采用ELISA检测sHLA-G水平。 2.用RT-PCR检测HCMV AD169株感染THP-1细胞IL-6、TNF-α、IL-10和1FN-γmRNA的表达;ELISA检测THP-1细胞培养上清液中IL-6、TNF-α、IL-10和IFN-γ水平。 3.HCMV AD169株感染THP-1细胞，利用DCFH-DA法检测THP-1细胞内活性氧，Annexin V-FITC/PI检测THP-1细胞的凋亡率;并用Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase3和p38 MAPK。 结果: 1.HCMV感染THP-1细胞对HLA-G异构体表达的影响 HCMV感染THP-1细胞1～5d后， HLA-G异构体mRNA的表达以HLA-G1、-G3、-G4和-G5为主，感染后第1天HLA-G1、-G3、-G4和-G5 mRNA的表达明显上调，与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。HLA-G异构体蛋白的表达以HLA-G1和HLA-G5为主，感染后第1天，HLA-G1和HLA-G5蛋白的表达明显上调，与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。细胞表面HLA-G、ILT2和ILT4的表达在感染后第1天明显上调，与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.01)，感染1天后细胞表面HLA-G、ILT2和ILT4的表达下降;到感染后第4天，细胞表面HLA-G的表达出现下调，与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。sHLA-G水平在感染后第1天后显著升高，与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.01)，感染1天后，sHLA-G水平降低。 2.HCMV感染THP-1细胞对其细胞因子分泌的影响 HCMV感染THP-1细胞1～5d后，细胞因子IL-6、TNF-α和IL-10 mRNA的表达在感染后第1天明显上调，与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)，感染2天后IL-6、TNF-α和IL-10 mRNA的表达下降。感染后第3天，IFN-γ mRNA的表达明显上调，与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.01)。THP-1细胞培养上清液中IL-6、TNF-α、IL-10和IFN-γ水平的变化与对应mRNA的表达基本一致。3.HCMV感染THP-1细胞对其凋亡的影响 HCMV感染THP-1细胞1～5d后，THP-1细胞内活性氧水平先升高后降低，THP-1细胞的凋亡率先增加后减少;抗凋亡蛋白Bcl-2的表达随着感染时间的延长而逐渐升高，促凋亡蛋白Bax和caspase3的表达随着感染时间的延长而逐渐下降，同时p38 MAPK信号通路激活。 结论: HCMV感染THP-1细胞能诱导HLA-G异构体的差异表达，以HLA-G1和HLA-G5明显升高为主。HCMV感染THP-1细胞能诱导THP-I细胞分泌细胞因子IL-6、TNF-α、IL-10和IFN-γ，其中IL-10和TNF-α在感染后第1天显著升高，而IFN-γ在感染后第3天才显著升高。HCMV早期感染THP-1细胞能抑制细胞凋亡。该研究为进一步探讨HCMV逃避机体免疫应答的机制提供实验依据。