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[目的]
检测鼻咽癌组织和细胞中miRNA-146a的表达情况;对miRNA-146a的靶基因进行预测;观察LMP-1和miRNA-146a靶基因所编码蛋白(E-cadherin)在鼻咽癌组织和细胞中的表达情况。初步探讨miRNA-146a在鼻咽癌发生发展过程中的作用。
[方法]
(1)采用Real Time RT-PCR检测16例鼻咽非角化性未分化癌、13例鼻咽粘膜慢性炎组织和体外培养的鼻咽癌细胞CNE1、CNE2Z、CNE1-GL中miRNA-146a的表达情况。
(2)应用生物信息学的方法,通过PicTar和TargetScan在线数据查询软件预测miRNA-146a分子可能参与调控的靶基因。
(3)采用免疫组织化学SP法检测LMP-1蛋白和miRNA-146a靶基因所编码蛋白(E-cadherin)的表达,并分析两者的相互关系。
[结果]
(1)临床病理标本Real Time RT-PCR检测结果显示:鼻咽非角化性未分化癌和鼻咽粘膜慢性炎组织中的miRNA-146a的△Ct值分别是5.145±2.138和7.895±2.790,2-△△Ct值分别是8.111和1(P＜0.05)。
(2)鼻咽癌细胞Real Time RT-PCR检测结果显示:CNE1、CNE2Z和CNE1-GL中miRNA-146a的△Ct值分别是12.955±2.648、13.833±1.010和1.154±0.765,2-△△Ct值分别是1、0.946和1.273(CNE1 vs.CNE1-GL,P＜0.05;CNE2Z vs.CNE1-GL,P＜0.05;CNE1 vs.CNE2Z,P＞0.05)
(3)运用PicTar和TargetScan数据库对miRNA-146a进行靶基因预测,经过筛选发现miRNA-146a的其中1个靶基因是CDH1(见图2.1)。
(4)临床病理标本免疫组织化学结果显示:鼻咽非角化性未分化癌和鼻咽粘膜慢性炎组织织LMP-1的阳性率分别是62.5％和17.9%(P＜0.01);E-cadherin的阳性率分别是56%和100%(P＜0.01);Spearman相关性分析结果显示,在鼻咽非角化性未分化癌组织中LMP-1蛋白的表达与E-cadherin蛋白的表达呈负相关关系。
(5)免疫细胞化学结果显示:LMP-1在CNE1、CNE2Z、CNE1-GL中的阳性率分别为0、(87.2±1.8)%和(98.4±2.2)%(P＜0.01);E-cadherin的阳性率分别是(44.2±2.6)%、(39±2.4)%和(19±3.2)%(P＜0.01)。
[结论]
(1)鼻咽非角化性未分化癌组织中miRNA-146a的表达高于鼻咽粘膜慢性炎组织,提示miRNA-146a可能与鼻咽癌的发生有关,在鼻咽癌的发生发展过程中miRNA-146a可能扮演着癌基因的角色。
(2)miRNA-146a在鼻咽癌细胞CNE1-GL中的表达高于CNE1和CNE2Z,提示miRNA-146a表达水平的上调可能与LMP-1有关。
(3)鼻咽非角化性未分化癌组织中LMP-1蛋白的表达与E-cadherin蛋白的表达呈负相关关系;鼻咽癌细胞中随着LMP-1蛋白表达的增强,E-cadherin蛋白表达有减弱的趋势,均提示LMP-1可能抑制E-cadherin蛋白的表达。